新型抗AD藥物971對東莨菪堿模型大鼠的作用及影響記憶功能機制研究.pdf

1、971是從褐藻中分離提取,并經(jīng)降解得到的具有特定分子骨架的低分子量海洋酸性寡糖類化合物(MW=1,300Da),易透過血腦屏障且毒副作用低,是一新型抗老年性癡呆候選海洋藥物.前期研究結(jié)果表明:971對Aβ<,25-35>腦內(nèi)注射所致癡呆動物模型的學習記憶功能有明顯改善作用,且這種作用可能與其抗氧化作用有關(guān).為進一步證實這一結(jié)論,我們選用了能反映氧化損傷的東莨菪堿癡呆動物模型及體外細胞模型,進一步觀察了971體內(nèi)外的抗氧化損傷作用;并從神

2、經(jīng)可塑性的角度初步探討了971影響記憶功能的機制.該研究首先采用Morris水迷營法觀察了971對東莨菪堿誘導的記憶障礙大鼠學習記憶的影響,并在H<,2>O<,2>損傷的SH-SY5Y細胞模型上,進一步研究了971抗老年性癡呆作用的可能分子機制.結(jié)果發(fā)現(xiàn)預先給予大鼠971 30天可明顯改善東莨菪堿導致的大鼠記憶障礙,即971明顯縮短大鼠逃避潛伏期、游泳距離和空間探索實驗中第一次達平臺時間,延長大鼠在原平臺所在象限游泳時間,增加大鼠的穿梭

3、次數(shù).在實驗中還發(fā)現(xiàn)作為M膽堿受體拮抗劑的東莨菪堿可以提高大鼠大腦皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量,同時使海馬和大腦皮質(zhì)中的抗氧化酶包括SOD、GSH-Px失活,提示東莨菪堿在誘導記憶障礙的劑量下對大腦產(chǎn)生了氧化損傷.東莨菪堿還明顯降低ATPase的活性,以上作用均可被971翻轉(zhuǎn)卻971明顯降低大鼠大腦皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)的含量,同時拮抗東莨菪堿模型大鼠海馬和大腦皮質(zhì)中的抗氧化酶SOD、GSH-Px的失活,明顯提高東

4、莨菪堿模型大鼠降低的ATPase活性,提示971拮抗東莨菪堿致大鼠記憶障礙的機制與其抗氧化作用密切相關(guān);體外實驗中,用MTT法觀察了971對H<,2>O<,2>損傷的SH-SY5Y細胞的影響,發(fā)現(xiàn)971對H<,2>O<,2>損傷具有明顯保護作用;流式細胞儀檢測結(jié)果顯示971可明顯抑制H<,2>O<,2>導致的細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高,并明顯升高細胞線粒體膜電位,抑制P53蛋白和Caspase-3表達的升高;Western blotti

5、ng結(jié)果提示971可上調(diào)SH-SY5Y細胞內(nèi)pi-ERK1/2的表達,最終抑制H<,2>O<,2>導致的神經(jīng)細胞凋亡.提示971抗氧化作用與其抗老年性癡呆作用有關(guān).該研究還在細胞水平上觀察了971對Aβ<,25-35>作用的神經(jīng)細胞突起生長的影響,并對其分子機制進行了初步探討.結(jié)果表明971可以明顯改善老化的Aβ<,25-35>對SH-SY5Y細胞神經(jīng)突起生長的抑制作用,這種作用可能與其抑制Aβ<,25-35>導致的SH-SY5Y細胞內(nèi)