新型抗AD藥物971對東莨菪堿模型大鼠的作用及影響記憶功能機(jī)制研究.pdf

1、971是從褐藻中分離提取,并經(jīng)降解得到的具有特定分子骨架的低分子量海洋酸性寡糖類化合物(MW=1,300Da),易透過血腦屏障且毒副作用低,是一新型抗老年性癡呆候選海洋藥物.前期研究結(jié)果表明:971對Aβ<,25-35>腦內(nèi)注射所致癡呆動物模型的學(xué)習(xí)記憶功能有明顯改善作用,且這種作用可能與其抗氧化作用有關(guān).為進(jìn)一步證實(shí)這一結(jié)論,我們選用了能反映氧化損傷的東莨菪堿癡呆動物模型及體外細(xì)胞模型,進(jìn)一步觀察了971體內(nèi)外的抗氧化損傷作用;并從神

2、經(jīng)可塑性的角度初步探討了971影響記憶功能的機(jī)制.該研究首先采用Morris水迷營法觀察了971對東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶障礙大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響,并在H<,2>O<,2>損傷的SH-SY5Y細(xì)胞模型上,進(jìn)一步研究了971抗老年性癡呆作用的可能分子機(jī)制.結(jié)果發(fā)現(xiàn)預(yù)先給予大鼠971 30天可明顯改善東莨菪堿導(dǎo)致的大鼠記憶障礙,即971明顯縮短大鼠逃避潛伏期、游泳距離和空間探索實(shí)驗(yàn)中第一次達(dá)平臺時間,延長大鼠在原平臺所在象限游泳時間,增加大鼠的穿梭

3、次數(shù).在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)作為M膽堿受體拮抗劑的東莨菪堿可以提高大鼠大腦皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量,同時使海馬和大腦皮質(zhì)中的抗氧化酶包括SOD、GSH-Px失活,提示東莨菪堿在誘導(dǎo)記憶障礙的劑量下對大腦產(chǎn)生了氧化損傷.東莨菪堿還明顯降低ATPase的活性,以上作用均可被971翻轉(zhuǎn)卻971明顯降低大鼠大腦皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)的含量,同時拮抗東莨菪堿模型大鼠海馬和大腦皮質(zhì)中的抗氧化酶SOD、GSH-Px的失活,明顯提高東

4、莨菪堿模型大鼠降低的ATPase活性,提示971拮抗東莨菪堿致大鼠記憶障礙的機(jī)制與其抗氧化作用密切相關(guān);體外實(shí)驗(yàn)中,用MTT法觀察了971對H<,2>O<,2>損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的影響,發(fā)現(xiàn)971對H<,2>O<,2>損傷具有明顯保護(hù)作用;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示971可明顯抑制H<,2>O<,2>導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高,并明顯升高細(xì)胞線粒體膜電位,抑制P53蛋白和Caspase-3表達(dá)的升高;Western blotti

5、ng結(jié)果提示971可上調(diào)SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)pi-ERK1/2的表達(dá),最終抑制H<,2>O<,2>導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞凋亡.提示971抗氧化作用與其抗老年性癡呆作用有關(guān).該研究還在細(xì)胞水平上觀察了971對Aβ<,25-35>作用的神經(jīng)細(xì)胞突起生長的影響,并對其分子機(jī)制進(jìn)行了初步探討.結(jié)果表明971可以明顯改善老化的Aβ<,25-35>對SH-SY5Y細(xì)胞神經(jīng)突起生長的抑制作用,這種作用可能與其抑制Aβ<,25-35>導(dǎo)致的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)