魚腥草MVD基因cDNA克隆及揮發(fā)油分析.pdf

1、魚腥草為三白草科蕺菜屬植物(Houttuynia cordata Thunb),是一種酚類和多糖物質(zhì)含量很高的草本植物,由于多糖的干擾,其RNA提取比較困難。甲羥戊酸(MVA)途徑存在于植物質(zhì)體中,該途徑的產(chǎn)物異物烯基焦磷酸(IPP)是揮發(fā)性油合成的重要前體物質(zhì)。甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶(MVD)直接催化MVA途經(jīng)中由MVAPP生成重要前體IPP的反應(yīng),是MVA途經(jīng)中的一個(gè)關(guān)鍵酶。本文以湘白魚腥草為材料,對(duì)魚腥草從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究:<

2、br>　　 (1)為篩選出適合魚腥草葉片RNA提取的方法,以魚腥草葉片為材料,比較了經(jīng)典RNA提取試劑盒、Trizol試劑盒A、Trizol試劑盒B以及富含多糖類材料RNA提取試劑盒的效果。結(jié)果表明Trizol試劑盒和經(jīng)典RNA提取試劑盒難以提取出高質(zhì)量的RNA,說明普通RNA提取試劑盒難以提取出高效的魚腥草葉片總RNA。而富含多糖類材料RNA提取試劑盒提取的RNA質(zhì)量高,完整性好,可以滿足進(jìn)一步分子生物學(xué)研究的要求。
　　

3、(2)本文利用NCBI,GENEDOC.EXE,Primer Premier5.0等數(shù)據(jù)庫和軟件設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并性引物進(jìn)行RT-PCR,從魚腥草中克隆到1個(gè)長度為514bp的cDNA片段,再分別采用3'RACE方法和GenomeWalker方法擴(kuò)增出MVD基因cDNA的3'和5'末端。魚腥草MVD基因cDNA包括1266bp的開放閱讀框,編碼421個(gè)氨基酸,該序列已經(jīng)提交到GenBank數(shù)據(jù)庫,登錄號(hào)為JF430481。
　　 (3)采

4、用熒光定量PCR研究了MVD基因在根、莖、葉、花四個(gè)部位中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示在根中的表達(dá)量很高,在莖、葉和花中表達(dá)量都很低。采用水蒸氣蒸餾提取魚腥草揮發(fā)性油,魚腥草根、莖、葉、花四個(gè)部位揮發(fā)性油含量為花＞根＞葉＞莖。采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)揮發(fā)性油組分進(jìn)行鑒定,根、莖、葉和花四部位共鑒定出35種化合物,其中共有化合物24種,各部位揮發(fā)性油組分基本一致;采用峰面積歸一化法測(cè)定各組分含量,含量存在較大差異,甲基正壬酮含量最高;結(jié)合主成分分