氯化鎘致突變作用和相關(guān)機(jī)制及拮抗劑的研究.pdf

1、該研究旨在全面了解鎘體外致突變作用及其特點(diǎn),探討相關(guān)機(jī)制;進(jìn)而研究鎘的遺傳毒性拮抗劑-鋅的作用及機(jī)制,為今后鎘環(huán)境暴露的預(yù)防工作提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:該研究是在體外實(shí)驗(yàn)體系中,以中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞(V79,為國際上通用的細(xì)胞株)為研究對(duì)象,在細(xì)胞毒性基礎(chǔ)上采用克隆法研究不同劑量氯化鎘(CdCl<,2>)對(duì)V79細(xì)胞hprt基因位點(diǎn)突變頻率的影響;采用堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE),分別檢測(cè)不同劑量CdCl<,2>對(duì)V79細(xì)胞D

2、NA的損傷作用、對(duì)由過氧化氫(H<,2>O<,2>)所致DNA損傷后修復(fù)的影響以及CdCl<,2>所致的V79細(xì)胞凋亡的變化,凋亡同時(shí)還采用了AO/EB雙標(biāo)記法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)進(jìn)行分析.以上在檢測(cè)CdCl<,2>單獨(dú)染毒效應(yīng)的同時(shí)還采用了生理濃度(10μmol/L)的氯化鋅(ZnCl<,2>)與不同劑量CdCl<,2>同時(shí)作用于V79細(xì)胞,以觀察ZnCl<,2>對(duì)于CdCl<,2>所致細(xì)胞毒性、hprt基因位點(diǎn)突變、DNA損傷、

3、修復(fù)和凋亡作用的影響.最后,分別采用等離子體光譜儀技術(shù)以及活性氧(ROS)熒光探針結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)測(cè)定V79細(xì)胞在CdCl<,2>單獨(dú)及CdCl<,2>與ZnCl<,2>同時(shí)染毒后細(xì)胞內(nèi)cd<'2+>、Zn<'2+>以及ROS的含量變化,以探討鎘的毒性機(jī)制以及鋅的拮抗機(jī)制.結(jié)論:CdCl<,2>可以引起V79細(xì)胞急、慢性細(xì)胞毒性;對(duì)V79細(xì)胞具有致突變作用,鎘所致的hprt基因位點(diǎn)突變頻率增高存在兩個(gè)峰值,這是其他研究者未曾報(bào)道

4、的.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),CdCl<,2>的致突變作用可能是由于其對(duì)于V79細(xì)胞DNA的損傷、DNA修復(fù)的抑制和對(duì)細(xì)胞凋亡的作用所引起的,其中對(duì)于DNA損傷和修復(fù)的影響可能是造成突變的主要原因.生理劑量的ZnCl<,2>可以拮抗CdCl<,2>所致的細(xì)胞毒性和突變效應(yīng),并且可抑制由CdCl<,2>所引起的DNA損傷、修復(fù)及凋亡作用,其中鋅對(duì)鎘致突變作用的影響也未見報(bào)道.生理濃度的ZnCl<,2>可能是通過減少Cd<'2+>進(jìn)入細(xì)胞以及降低細(xì)胞