氯化鎘致突變作用和相關(guān)機制及拮抗劑的研究.pdf

1、該研究旨在全面了解鎘體外致突變作用及其特點,探討相關(guān)機制;進而研究鎘的遺傳毒性拮抗劑-鋅的作用及機制,為今后鎘環(huán)境暴露的預(yù)防工作提供一定的實驗依據(jù).方法:該研究是在體外實驗體系中,以中國倉鼠肺成纖維細胞(V79,為國際上通用的細胞株)為研究對象,在細胞毒性基礎(chǔ)上采用克隆法研究不同劑量氯化鎘(CdCl<,2>)對V79細胞hprt基因位點突變頻率的影響;采用堿性單細胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE),分別檢測不同劑量CdCl<,2>對V79細胞D

2、NA的損傷作用、對由過氧化氫(H<,2>O<,2>)所致DNA損傷后修復(fù)的影響以及CdCl<,2>所致的V79細胞凋亡的變化,凋亡同時還采用了AO/EB雙標記法結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)進行分析.以上在檢測CdCl<,2>單獨染毒效應(yīng)的同時還采用了生理濃度(10μmol/L)的氯化鋅(ZnCl<,2>)與不同劑量CdCl<,2>同時作用于V79細胞,以觀察ZnCl<,2>對于CdCl<,2>所致細胞毒性、hprt基因位點突變、DNA損傷、

3、修復(fù)和凋亡作用的影響.最后,分別采用等離子體光譜儀技術(shù)以及活性氧(ROS)熒光探針結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)測定V79細胞在CdCl<,2>單獨及CdCl<,2>與ZnCl<,2>同時染毒后細胞內(nèi)cd<'2+>、Zn<'2+>以及ROS的含量變化,以探討鎘的毒性機制以及鋅的拮抗機制.結(jié)論:CdCl<,2>可以引起V79細胞急、慢性細胞毒性;對V79細胞具有致突變作用,鎘所致的hprt基因位點突變頻率增高存在兩個峰值,這是其他研究者未曾報道

4、的.進一步研究發(fā)現(xiàn),CdCl<,2>的致突變作用可能是由于其對于V79細胞DNA的損傷、DNA修復(fù)的抑制和對細胞凋亡的作用所引起的,其中對于DNA損傷和修復(fù)的影響可能是造成突變的主要原因.生理劑量的ZnCl<,2>可以拮抗CdCl<,2>所致的細胞毒性和突變效應(yīng),并且可抑制由CdCl<,2>所引起的DNA損傷、修復(fù)及凋亡作用,其中鋅對鎘致突變作用的影響也未見報道.生理濃度的ZnCl<,2>可能是通過減少Cd<'2+>進入細胞以及降低細胞