重組水蛭素誘導bFGF表達,促進靜脈淤血皮瓣存活的實驗研究.pdf

1、目的:本實驗通過建立兔耳靜脈淤血皮瓣模型,分別以高劑量重組水蛭素、低劑量重組水蛭素、注射生理鹽水于局部注射,研究重組水蛭素誘導靜脈淤血皮瓣bFGF的表達,促進微血管增生,從而提高靜脈淤血皮瓣的存活率,進一步探討重組水蛭素在靜脈淤血皮瓣領域的應用前景。
　　 方法:健康普通大耳白兔72只,雌雄不拘,體重(2000±200g),隨機分為3組:2個治療組(A組:高劑量重組水蛭素治療組和B組:低劑量重組水蛭素治療組)和1個對照組(C組:

2、注射生理鹽水組),每組24只,按40 mg／kg體重、2％戊巴比妥鈉左耳緣靜脈注射麻醉,麻醉后側臥位,消毒鋪無菌巾。于右耳背部設計含耳中央動靜脈、神經為蒂(蒂寬1cm)的寬為4cm、長為6cm的軸型皮瓣。顯微手術操作分離出耳中央動靜脈和神經,耳中央靜脈和神經于蒂部切斷,一并結扎其他旁支靜脈,形成淤血皮瓣模型。治療組分別在術后即刻、術后2小時、術后8時、術后16小時、第2、4、6天給予皮瓣蒂部皮下三等分點均勻注射重組水蛭素(2mg／1ml

3、／皮瓣)和(1mg／1ml／皮瓣),空白對照組同法給予等量(1ml)生理鹽水,皮瓣原位回植。術后觀察皮瓣表面毛發(fā)脫落情況,血腫形成情況,皮瓣存活率,分別于術后1、3、5、7天取遠端病理組織檢測皮瓣內bFGF水平,同時制備術后1、3、5、7天皮瓣遠端組織病理切片于高倍鏡視野下做微血管密度分析,并做免疫組化觀察各組毛細血管生成情況及MVD與bFGF表達。
　　 結果:1.大體觀察:術后第1天3組皮瓣遠端均出現(xiàn)不同程度的組織腫脹淤血,

4、空白組較高劑量重組水蛭組和低劑量重組水蛭素組淤血程度明顯,呈暗紫色,高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組淤血帶界限不明顯,空白組淤血帶界限明顯。術后第3、7天,高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組皮瓣遠端淤血腫脹逐步減退直至基本消散,愈合良好。空白對照組皮瓣遠端和周緣顏色發(fā)黑,質硬,局部毛發(fā)脫落,無毛細血管反應,趨于壞死。術后第7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組成活面積百分比分別為(94.64±1.90)％和(94.64±1

5、.90)％,均比空白對照組(78.86±1.08)％高,有顯著性差異(p<0.01),高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組皮瓣成活率相當,差異無統(tǒng)計學意義(p<0.05)。2.微血管密度(MVD)[1]:取各試驗組第1、3、5、7天病理切片,將胞漿呈黃染的與周圍其他組織有明顯界限的內皮細胞或內皮細胞串,無論有無管腔,計數(shù)為1個血管。先在低倍鏡下(×100)選擇內皮細胞染色最多的區(qū)域,再在高倍鏡(HP,×400)下計數(shù)這一區(qū)域的血管個數(shù)

6、,記錄每高倍視野的血管數(shù),選最大的3個數(shù)值的平均數(shù)作為MVD。第1天各實驗組未見明顯毛細血管生成,第3、5、7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組毛細血管數(shù)量／HP分別為(8.5±0.9)與(5.6±0.7)、(11.6±0.8)與(8.5±1.0)和(12.0±0.5)與(8.9±1.0),均比空白組(3.5±0.8)、(3.0±0.7)和(2.3±0.6)高,其差異均有統(tǒng)計學意義。3.bFGF含量檢測(pg／ml):術后第1、3

7、、5、7天,高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組bFGF含量分別為(47.32±2.04)與(49.54±2.15)、(69.12±1.68)與(54.76±1.52)、(82.70±0.61)與(60.11±0.72)和(84.48±0.82)與(64.55±0.63),其對應空白組為(49.15±1.42)、(50.06±1.45)、(48.10±0.24)和(50.32±0.51),第3、5、7天高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水

8、蛭素組與空白對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),第5、7天高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),余各實驗組相互比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。4.MVD與bFGF表達:高劑量重組水蛭素組和低劑量重組水蛭素組與空白對照組于1、3、5、7天MVD與bFGF表達水平呈明顯正相關(r=0.368,P<0.01),第3、5、7天高劑量重組水蛭素組與低劑量重組水蛭素組MVD與bFGF表達水平呈明