構(gòu)建以Th17應(yīng)答為主致氣道中性粒細(xì)胞增高的小鼠哮喘模型.pdf

1、背景和目的:
　　支氣管哮喘是一種以氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥細(xì)胞浸潤、杯狀細(xì)胞增生和氣道重塑等為特征的過敏性疾病。免疫應(yīng)答失衡是其眾多發(fā)病機(jī)制中最重要的一種。以往研究表明，活化的CD4+Th2細(xì)胞增多可致氣道及血管周圍嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，Th1/ Th2免疫應(yīng)答反應(yīng)失衡也作為哮喘發(fā)病的主要原因廣泛應(yīng)用于臨床和基礎(chǔ)研究中。新近發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞家族新成員Th17細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子IL-17可募集、趨化中性粒細(xì)胞致病原入侵部位，在宿主

2、防御中發(fā)揮積極作用。近年來，國內(nèi)外學(xué)者均在哮喘患者肺泡灌洗液及血清中發(fā)現(xiàn)較高水平IL-17。且重癥哮喘患者和對糖皮質(zhì)激素治療抵抗者中氣道以中性粒細(xì)胞浸潤為主，嗜酸性粒細(xì)胞比例下降甚至未檢出。Th17免疫應(yīng)答增強(qiáng)或許是哮喘發(fā)病的新機(jī)制。為此，本研究擬建立氣道炎癥以中性粒細(xì)胞浸潤為主的小鼠哮喘模型，并初步探討Th17免疫應(yīng)答的作用。
　　方法:
　　1.腹腔致敏構(gòu)建氣道炎癥以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主的經(jīng)典小鼠哮喘模型，并鑒定。

3、>　　2.經(jīng)卵清蛋白(ovalbumin，OVA)孵化過夜的樹突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)與靜息型T細(xì)胞共培養(yǎng)，加入脂多糖(LPS)刺激，檢測T細(xì)胞的分化。
　　3.改進(jìn)傳統(tǒng)建模方法，增加氣道滴入LPS+OVA致敏，從氣道高反應(yīng)性，肺組織T細(xì)胞分化，支氣管肺泡灌洗液(BALF)炎癥細(xì)胞分類，肺組織病理學(xué)觀察等方面鑒定新模型。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)典小鼠哮喘模型構(gòu)建成功:存在氣道高反應(yīng)性;氣道周圍炎癥細(xì)

4、胞浸潤明顯;BALF細(xì)胞沉淀分類見嗜酸性粒細(xì)胞增多，細(xì)胞因子IL-5水平顯著升高。
　　2.共培養(yǎng)結(jié)果表明，OVA-DC可刺激靜息型T細(xì)胞向Th2方向偏移;而LPS-OVA-DC可刺激靜息型T細(xì)胞向Th17方向偏移。
　　3.在傳統(tǒng)模型構(gòu)建方法基礎(chǔ)上增加氣道給藥LPS+OVA致敏，構(gòu)建新小鼠哮喘模型:氣道高反應(yīng)性明顯;氣道與血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤;BALF細(xì)胞沉淀分類見中性粒細(xì)胞增多，細(xì)胞因子IL-17、IL-8、TNF-α增