CpxAR雙組份調(diào)控系統(tǒng)在胸膜肺炎放線桿菌中對生物被膜和毒力功能的影響研究.pdf

1、胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)是一種具有高度傳染性的呼吸道病原體，以纖維素性壞死性支氣管肺炎和纖維素性胸膜炎為特征，可引起豬傳染性胸膜肺炎，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。有研究表明，在多個菌種中CpxAR雙組份調(diào)控系統(tǒng)在調(diào)控細(xì)菌毒力作用方面發(fā)揮著重要功能，并且參與生物被膜形成以及耐藥性機(jī)制，但是其在APP中的功能尚不清楚。本文通過研究CpxAR基因缺失株，研究了CpxAR在A

2、PP中對于生物被膜形成、耐藥性以及毒力功能上的作用。
　　1.雙組分調(diào)控系統(tǒng)CpxAR基因缺失株的鑒定與生長曲線測定
　　CpxAR基因缺失株及其互補(bǔ)菌株由本實(shí)驗(yàn)室保存，通過PCR及基因測序驗(yàn)證了其正確性，在不同培養(yǎng)基中的生長曲線通過每小時OD600的值得以測定，通過嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了CpxAR對APP的應(yīng)激耐受能力發(fā)揮作用。
　　2.基因缺失株與野生株生物被膜形成能力和耐藥性的比較
　　在生物被膜形成能力的

3、檢測試驗(yàn)中，通過96孔板結(jié)晶紫染色法比較了野生株S4074，突變株ACpxAR以及互補(bǔ)菌株CACpxAR三者形成生物被膜能力的差異，結(jié)果證實(shí)了缺失CpxAR后，APP形成生物被膜的能力明顯降低。同時，通過比較三種菌株對不同抗生素的MIC值，比較了其耐藥性上的差異。
　　3.CpxAR調(diào)控APP生物被膜形成的分子機(jī)制研究
　　通過熒光定量PCR試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了受CpxAR調(diào)控的生物被膜相關(guān)基因。利用電泳遷移分析法和DNaseⅠ足跡法