間接ELISA檢測胸膜肺炎放線桿菌型特異性抗體的研究.pdf

1、本研究分別提純了胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacilus pleuropneumoniae,APP)血清1～10型的莢膜多糖抗原和脂多糖抗原，建立了檢測APP型特異性抗體的間接ELISA。通過血清型間的交叉反應試驗，篩選出各血清型菌的最佳型特異性抗原，為APP的準確診斷與分型提供新的方法。 分別提取APP的莢膜多糖抗原和脂多糖抗原用于建立檢測各型抗體的間接ELISA，通過ELISA反應條件的優(yōu)化，確定了最佳反應條件：莢膜多糖

2、抗原包被濃度為13μg/mL，脂多糖抗原包被濃度為11μg/mL；封閉液為含1％牛血清白蛋白(BSA)的0.01mol/L pH7.4的PBS，37℃封閉60min；血清工作條件為200倍稀釋，37℃孵育60min；辣根過氧化物酶標記的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)工作條件為4000倍稀釋，37℃孵育30min；阻斷試驗表明：莢膜多糖和脂多糖均能阻斷該型陽性血清與相應包被抗原的反應，具有特異性。初步確定了判定標準：以P/N值≥2.1判

3、定為陽性，P/N<2.1判定為陰性。重復性實驗表明該法重復性較好。 以APP各血清型菌的莢膜多糖和脂多糖作為包被抗原建立間接ELISA檢測各血清型菌的陽性血清，1型和4型的莢膜多糖及2型和10型的脂多糖只與同型菌的陽性血清反應，與其它型陽性血清不反應，以這四種抗原建立的間接ELISA具有良好的型特異性，可用于檢測APP1型、2型、4型和10型的抗體，而其它各型的莢膜多糖和脂多糖與異型血清具有不同程度的交叉反應。 以APP