用免疫磁珠技術(shù)分離豬胸膜肺炎放線桿菌.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumonia，PCP）是當(dāng)前最常見的呼吸道傳染病之一，以急性死亡或呈慢性經(jīng)過，生長緩慢為臨床經(jīng)過。病理變化上以肺出血性壞死和纖維素性肺炎為主要特征。胸膜肺炎放線桿菌是其病原。分離鑒定病原是確診疾病和開展病原流行病學(xué)的重要前提。在本病原分離方法上，主要依靠采用將病料直接接種TSA培養(yǎng)基或使用選擇性培養(yǎng)基提高細(xì)菌分離率。然而，由于細(xì)菌比較容易失活，導(dǎo)致病料中的活細(xì)菌數(shù)

2、量相對較少，致使分離的效果不理想。因此，探索一種細(xì)菌分離的新方法具有現(xiàn)實意義。也為其它細(xì)菌的分離提供借鑒作用。 免疫磁珠技術(shù)是近年國內(nèi)外研究的一種新的免疫學(xué)技術(shù)，免疫磁珠是免疫微球的一種，它具備了固相化試劑特有的優(yōu)點以及免疫學(xué)反應(yīng)的高度專一性，并具有分離速度快、效率高和可重復(fù)性好；同時操作簡單，不需要昂貴的儀器設(shè)備。所以它在免疫檢測，免疫吸附，細(xì)胞分離和培養(yǎng)等領(lǐng)域中得到越來越廣泛的應(yīng)用。 本試驗利用表達(dá)和純化胸膜肺炎放線

3、桿菌中保守的外膜蛋白，作為抗原（種特異性非血清型特異性抗原），免疫家兔制備抗血清，純化IgG用此IgG包被免疫微球，確定了包被磁珠所需的IgG濃度和包被時間。建立了利用免疫磁珠技術(shù)檢測胸膜肺炎放線桿菌的操作流程，所有的14個血清型均能被檢測，敏感性高達(dá)10.6 CFU／ml.用此技術(shù)分離送檢的20個疑似菌株，分離出10個菌株，并用瓊脂擴散試驗對每個菌株進(jìn)行了血清分型。與apxIV-PCR檢測結(jié)果相比，符合率為100％。本方法也能從人工感