磁性納米微粒介導(dǎo)的表達(dá)Endostatin的條件復(fù)制型腺病毒載體對肝癌的治療作用研究.pdf

1、中山大學(xué)博士后研究工作報(bào)告磁性納米微粒介導(dǎo)的表達(dá)Endostatin的條件復(fù)制型腺病毒載體對肝癌的治療作用研究博士后：唐啟彬合作導(dǎo)師：王捷教授專業(yè)：外科學(xué)評議委員會主席：冷希圣教授評議委員會成員：區(qū)金銳教授梁力健教授黃洪章教授區(qū)慶嘉教授中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院2006年12月中國廣州中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院博士后出站報(bào)告摘要測磁性殼聚糖納米顆粒對細(xì)胞的毒副作用；RTPCR檢測磁性殼聚糖納米顆粒對內(nèi)皮抑素基因表達(dá)的影響；構(gòu)建裸鼠肝癌移植瘤模型，瘤

2、內(nèi)注射磁性納米顆粒耦連的條件復(fù)制型腺病毒載體并在腫瘤局部加以磁場誘導(dǎo)，觀察病毒在體內(nèi)的分布。結(jié)果成功構(gòu)建了表達(dá)內(nèi)皮抑素的條件復(fù)制型腺病毒載體crAd—endo—eGFP及不含治療基因的條件復(fù)制型腺病crAdeGFP，并加以大規(guī)模擴(kuò)增、純化：利用流式細(xì)胞術(shù)分析crAd—endo—eGFP的轉(zhuǎn)染效率明顯高于質(zhì)粒pShuttle—endo—eGFP的轉(zhuǎn)染效率；RT—PCR、免疫組織化學(xué)技術(shù)、WesternBlot、ELISA均檢測到了crAd

3、endoeGFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞后內(nèi)皮抑素的表達(dá)，其中轉(zhuǎn)染了erAd—endo—eGFP病毒的HepG2細(xì)胞內(nèi)endostain的表達(dá)量明顯高于轉(zhuǎn)染了相同拷貝數(shù)復(fù)制缺陷型腺病毒載體Ad—endo—e6FP的細(xì)胞，而在HUEVC中，兩種病毒無明顯差別；轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，肝癌細(xì)胞株HepG2中，crAdendoeGFP及crAdeGFP的病毒拷貝數(shù)目明顯高于Ad—endoeGFP及AdeGFP，而在人臍帶靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUEVC中，病毒拷貝數(shù)目并無明顯

4、區(qū)別；復(fù)制型的crAdendo—eGFP對Hep62細(xì)胞的增殖抑制率明顯高于復(fù)制缺陷型的AdendoeGFP，而對于HUEVC細(xì)胞兩者并無明顯區(qū)別；流式細(xì)胞術(shù)檢測crAdendoeGFP可以使HUVBC細(xì)胞周期阻滯在Gl期，并誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡；細(xì)胞劃痕試驗(yàn)表明crAd—endo—eGFP可以明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力；在動物體內(nèi)，crAd—endo—eGFP可以抑制腫瘤的生長，并進(jìn)一步縮小腫瘤體積，并且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，其治療效果

5、明顯好于復(fù)制缺陷型的Adendo—eGPP；RT—PCR和免疫組織化學(xué)染色均檢測到了endostatin在腫瘤組織中的表達(dá)；HE染色crAd—endoeGFP治療組腫瘤組織內(nèi)有明顯的壞死灶，其它臟器組織內(nèi)無明顯改變；PCR檢測病毒DNA，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織內(nèi)和肝臟組織內(nèi)存在腺病毒E2基因，尤以腫瘤組織內(nèi)為高，其它臟器組織均未檢測到E2基因；CD31血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色證實(shí)crAd—endo—eGFP治療組腫瘤組織內(nèi)血管數(shù)目明顯減少：殼