血清淀粉樣蛋白A對人臍靜脈內皮細胞的影響研究初探.pdf

1、冠狀動脈疾病(Coronary Artery Disease，CAD)是最常見的心血管疾病，越來越受到全球人民的關注。冠心病的主要機制是動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)。為了更好地治療和預防AS，對AS形成過程的研究是十分有必要的。過去的研究證明，在AS形成過程中，一直有炎癥分子的參與。因此，AS現在被認為是一種慢性炎癥疾病。在炎癥刺激下C-反應蛋白(C-reactive protein，CRP)和血清淀粉樣蛋白A(

2、serum amyloid a，SAA)都能大量表達，而目前CRP已經被認為是一種能直接導致冠心病的危險因子。然而對SAA的研究卻相對較少，尤其在AS形成的直接作用方面。我們認為SAA可能對AS的形成有直接的作用。本文旨在探討SAA在誘導人臍靜脈內皮細胞炎癥過程中的直接作用，并對其作用機制進行一定的研究；探討SAA在人臍靜脈內皮細胞的內皮型一氧化氮合酶的表達以及一氧化氮合成中的作用；并對SAA和肥胖的相關性進行一定的研究。為臨床治療冠心

3、病提供一定的依據。本研究主要從三個方面展開工作。
　　 第一部分血清淀粉樣蛋白A對人臍靜脈內皮細胞粘附分子表達的影響研究
　　 本章節(jié)主要研究血清淀粉樣蛋白A對人臍靜脈內皮細胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)粘附分子表達的影響，并對其作用機理進行一定的探討。用不同濃度的SAA作用體外培養(yǎng)的HUVEC，通過實時熒光定量PCR(RT-PCR)的方法檢測細胞間粘附分子

4、-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和E-選擇素(E-selectin)的mRNA的表達。用酶聯免疫吸附(ELISA)的方法檢測細胞表面蛋白和分泌蛋白的表達。凝膠遷移實驗(EMSA)的方法檢測核蛋白和DNA的相互作用。實驗數據顯示用20μg/mL的人重組SAA刺激顯著誘導了HUVEC的

5、ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的mRNA的轉錄，作用2小時后粘附分子表達顯著增多，并且在4-6小時達到高峰，8小時后開始下降。ELISA的結果顯示SAA作用4小時后，細胞表面粘附分子表達顯著增多(p<0.05），作用24小時后細胞分泌的粘附分子顯著增多(P<0.05)。用核因子NFκB抑制劑BAY-11-7082可以阻斷SAA的這種作用。EMSA的結果顯示SAA可以直接活化NFKB。因此，通過本節(jié)的實驗證明SAA能顯著

6、誘導HUVEC粘附分子的表達，并且是通過NFκB途徑調控的。
　　 第二部分血清淀粉樣蛋白A對內皮功能影響的研究
　　 本章節(jié)主要研究SAA對HUVEC的內皮型一氧化氮合酶(eNOS)的作用，并對其作用機理進行一定的探討。在培養(yǎng)的人血管內皮細胞中，用重組的人的SAA刺激，收獲不同干預時間的細胞和培養(yǎng)液，通過RT-PCR的方法檢測eNOS的mRNA轉錄水平；通過免疫印跡的方法來檢測eNOS蛋白的表達量；通過比色分析的方法來

7、測定一氧化氮的產量：通過MTT法來測定內皮細胞的增殖。實驗結果顯示SAA(≥10μg/mL)能顯著地抑制eNOS基因的轉錄和蛋白的表達(P<0.05）；減少一氧化氮的產量和內皮細胞的增殖(P<0.05)。實驗證明SAA通過抑制eNOS的活性，減少一氧化氮的產量和內皮細胞的增殖，使內皮細胞功能受損。
　　 第三部分血清淀粉樣蛋白A和肥胖癥
　　 本章節(jié)主要是對已發(fā)表的一些研究進行統(tǒng)計分析，探討SAA和肥胖間的關系。在Pub

8、Med上以“serum amyloid A”和“obesity”為關鍵詞搜索。檢索到81篇從1966年1月到2009年7月的文章。其中只有11篇橫斷面調查研究和10篇成功的進行了介導減肥的文章符合本次Meta分析的要求。對篩選出的文章提取數據進行Meta分析。通過對11個橫斷面調查研究的分析發(fā)現SAA和體質指數(Body MassIndex，BMI)之間具有正相關性，相關系數：0.230(95％置信區(qū)間0.160-0.297，P<0.0