實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)進(jìn)展期胃下部癌MMP-7和TIMP-1 mRNA表達(dá)及其意義.pdf

1、胃癌是世界上最高發(fā)的惡性腫瘤之一，其死亡率在我國(guó)居各種惡性腫瘤之首。根治手術(shù)是胃癌目前的主要治療手段，術(shù)后5年生存率約為40％。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是胃癌患者手術(shù)治療失敗的主要原因，也是胃癌病死率高居不下的首要因素。研究胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素，尋求能準(zhǔn)確判斷胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)志物，探討幽門(mén)輪的防癌屏障作用的分子機(jī)制，成為胃癌研究工作的重點(diǎn)。
　　 腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)是腫瘤細(xì)胞分泌多種蛋白水解酶對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）和基

2、底膜的降解，在此環(huán)節(jié)中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）起到重要作用。MMP-7和TIMP-1分別是基質(zhì)金屬蛋白酶家族和金屬蛋白酶抑制劑家族中的重要一員，其在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　 目的：
　　 探討人胃癌腫瘤組織、幽門(mén)輪組織、十二指腸組織中MMP-7和TIMP-1 mRNA的表達(dá)及其與進(jìn)展期下部胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系；探討幽門(mén)輪在防癌屏障作用中可能的分子機(jī)制。
　　 材料與

3、方法：
　　 一、標(biāo)本收集
　　 收集中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科2008～2009年間52例遠(yuǎn)端胃癌患者手術(shù)標(biāo)本，各取腫瘤組織、幽門(mén)輪組織52例，十二指腸組織23例，并取相應(yīng)癌旁正常組織52例作對(duì)照，所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)化療或放療，所有病例術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)為進(jìn)展期遠(yuǎn)端胃癌。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 將幽門(mén)輪及十二指腸組織塊石蠟包埋切片后行HE染色，確定十二指腸及幽門(mén)輪侵襲情況。Trizol法提取

4、所有標(biāo)本總RNA，應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，Real-time PCR擴(kuò)增各個(gè)分子指標(biāo)，以β-actin做內(nèi)對(duì)照。Rotor-Gene6000實(shí)時(shí)定量系統(tǒng)分析各基因表達(dá)情況。全部數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，△CT值以mean±SD表示，進(jìn)行兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，組間率的比較采用X2檢驗(yàn)，P<0.05（雙尾）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、MMP-7在胃癌組織中表達(dá)平均高于癌旁正常組織2.

5、23倍（P<0.05），在幽門(mén)輪及十二指腸組織中表達(dá)平均較癌旁正常組織降低0.47倍和0.29倍（P<0.05）。
　　 2、TIMP-1在胃癌組織中表達(dá)平均較癌旁正常組織降低0.50倍（P<0.05），在幽門(mén)輪及十二指腸組織中表達(dá)較癌旁正常組織無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 3、MMP-7、TIMP-1在胃癌組織中表達(dá)增強(qiáng)與降低比率均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、組織分化程度、遠(yuǎn)端侵襲相關(guān)（均P<0.05），與腫瘤大小

6、、生長(zhǎng)方式、大體分型無(wú)關(guān)（均P>0.05）。
　　 4、MMP-7在幽門(mén)輪組織中表達(dá)與幽門(mén)輪侵襲相關(guān)（P<0.05），而TIMP-1在幽門(mén)輪組織中表達(dá)與幽門(mén)輪侵襲無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、MMP-7在胃癌腫瘤組織中高表達(dá)，在幽門(mén)輪及十二指腸組織中低表達(dá)，且其表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度及遠(yuǎn)端侵襲密切相關(guān)，提示其表達(dá)在胃癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到促進(jìn)作用。