肝卵圓細胞移植治療肝纖維化與肝功能不全的實驗研究.pdf

1、目的:建立一種穩(wěn)定而確實可靠的肝卵圓細胞分離方法,為后續(xù)的實驗研究奠定基礎。
　　 方法:參照Bryon等的報道,利用攜帶GFP(綠色熒光蛋白)轉基因C57BL/6小鼠12只,2只作為空白對照,10只喂以含濃度為0.1％的3,5-二乙酯基-1,4二氫三甲基吡啶(DDC),刺激卵圓細胞的增生。而后利用兩步酶灌注法分離出肝非實質細胞,以Sca-1抗體標記的免疫磁珠分選方法加以純化分離出攜帶有GFP的SCa-1+細胞。
　　

2、結果:DDC喂養(yǎng)小鼠6周后,病理切片結果顯示肝組織內可見明顯的肝卵圓細胞增生反應。分離每只小鼠得可到約106/ml的非肝實質細胞,培養(yǎng)擴增約5d后可見克隆樣生長的卵圓細胞,通過Sca-1抗體標記的免疫磁珠分選提純。電鏡下細胞直徑10-15μm,呈鋪路石樣排列,多角形,折光性強,核大,卵圓形,胞漿少,核仁明顯。經(jīng)過鑒定,分離得到的Sca-1+細胞符合卵園細胞的形態(tài)學表現(xiàn),也表達膽管上皮的表面標記OV-6及肝細胞的表面標記AFP,分離純度達

3、95％以上。
　　 結論:該方法穩(wěn)定可靠,可為肝卵圓細胞的相關研究提供較為理想的研究手段。
　　 目的:研究肝卵圓細胞在治療小鼠肝纖維化疾病中的有效性。
　　 方法:SPF級C57BL/6小鼠利用皮下注射四氯化碳的方法,建立小鼠肝纖維化模型。40只肝纖維化模型小鼠分為兩大組,將兩大組小鼠根據(jù)是否繼續(xù)皮下注射CCl4分為A、B兩組,其中A組為施予處理后(HOCA或NSA),繼續(xù)皮下注射CCl4,B組為施予處理后(H

4、OCB或NSB),不再皮下注射CCl4,每小組10只小鼠。4周后觀察肝功能各項指標、羥脯氨酸及膠原纖維及肝臟的病理改變,比較各組間的差別。
　　 結果:卵圓細胞經(jīng)脾臟移植后入肝,在共聚焦激光顯微鏡下可以觀察到肝組織中存在GFP陽性細胞,這些細胞主要分布于門脈區(qū)。在A組繼續(xù)皮下注射CCl4時,NSA組的ALT、AST均明顯升高；而HOCA組ALT、AST明顯降低,同時升高TP、ALB；HOCA組與NSA組兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義

5、(p＜0.05)；在B組未繼續(xù)皮下注射CCl4時,各組ALT、AST均下降,而且下降至近似正常水平,TP和ALB有升高,但兩兩比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。肝臟病理學檢測,在繼續(xù)皮下注射CCl4情況下,治療組肝纖維化程度有減輕,NSA組則呈典型肝纖維化改變；在未繼續(xù)皮下注射CCl4情況下,兩組肝纖維化程度都有不同程度減輕,HOCB組緩解更為明顯。
　　 結論:攜帶GFP的基因卵圓細胞經(jīng)短暫體外培養(yǎng)擴增,經(jīng)脾注射肝纖維化

6、小鼠體內后,可定植于受者肝臟內(主要聚集于匯管區(qū)),并可緩解肝纖維化的進展,促進肝纖維化的逆轉。
　　 目的:比較肝卵圓細胞與骨髓間充質干細胞治療小鼠肝纖維化的療效差別。
　　 方法:利用皮下注射四氯化碳的方法,建立小鼠肝纖維化模型。將肝纖維化/肝硬化成模小鼠60只隨機分為6組,即HOC移植治療組A(HOCA)、HOC移植治療組B(HOCB),MSC移植治療組A(MSCA)和MSC移植治療組B(MSCB),對照組A(NS

7、A)和對照組B(NSB),每組10只。根據(jù)不同的組別經(jīng)脾分別輸入卵圓細胞、生理鹽水(NS)或四氯化碳。4周后觀察肝功能各項指標、羥脯氨酸及膠原纖維及肝臟的病理改變,比較各組間的差別。
　　 結果:SPF級C57BL/6小鼠85只,其中6只行骨髓間充質干細胞提取,79只行肝纖維化模型制作,成功造模64只(成功率81％)。分別對兩組大鼠肝臟羥脯氨酸及膠原纖維含量這兩項指標進行檢測,統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)兩指標在各組間總體比較均有統(tǒng)計學差別(p

8、<0.05)。在繼續(xù)皮下注射CCl4情況下,比較各組間差異顯示HOCA組與MSCA組及NSA組之間的差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05),而MSCA組與NSA組間無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；在未繼續(xù)皮下注射CCl4情況下,進一步比較各組間差異顯示三組間均無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。病理組織學檢測結果,在未繼續(xù)皮下注射CCl4情況下,各組肝纖維化程度都有不同程度減輕,肝纖維化程度HOCB組