骨髓間充質干細胞肝內移植治療肝功能損傷的實驗研究.pdf

1、第一部分：骨髓間充質干細胞體內定向誘導分化與治療肝功能損傷的實驗研究 目的：觀察骨髓間充質干細胞(Meserlchymal Stem Cells，MSCs)在肝臟特定微環(huán)境下是否向具肝細胞表型與功能的細胞橫向分化(transdifferentiation)并探討其治療肝功能損傷的可行性。 方法：20只裸小鼠，隨機分為四組，每組5只：A組：經尾靜脈移植1×10<'6>個GFP陽性MSCs，術前一周及術后每周兩次經腹腔注射四

2、氯化碳0.5ml/kg：B組：經尾靜脈注入等量生理鹽水，CCL<,4>注射同前；C組：經尾靜脈移植1×10<,6>個GFP陽性MSCs，余未作任何干預：D組：正常對照。術后4周處死全部受試動物，血清檢測肝功能，HE、Masson染色行組織學觀察，雙熒光染色確認GFP陽性細胞并觀察其是否表達肝細胞特異性蛋白。 結果：A、B組受體肝纖維組織增生顯示肝功能損傷模型制作成功。A組鏡下可見GFP陽性細胞主要分布于匯管區(qū)(portal ar

3、ea)及小葉間隔周圍，部分同時表達白蛋白：B、C、D組鏡下均未見綠色熒光細胞。A組白蛋白水平明顯高于B組(P<0.05)，兩組ALT水平亦有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 結論：持續(xù)肝功能損傷可以有效誘導MSCs向肝遷移增殖，部分MSCs在肝細胞持續(xù)損傷的微環(huán)境下有向肝樣細胞(hepatocyte-like cells)橫向分化的潛能，MSCs移植可以在一定程度上修復受損肝功能。 第二部分：應用硝普鈉促進經門靜脈移植骨髓間

4、充質干細胞肝內彌散分布與增殖的實驗研究 目的：觀察與血管擴張藥硝普鈉(sodium nitroprusside)聯(lián)合注射是否促進經門靜脈移植骨髓間充質干細胞(mesenchyal stem cells，MSCs)肝內彌散分布與增殖，探尋理想的骨髓源性肝干細胞移植方法和途徑。 方法：彩色多普勒測量經腸系膜上靜脈注射硝普鈉(24nmol/100g)前后大鼠門靜脈內徑與血流變化。雄性SD大鼠10只，四氯化碳(CCL<,4>)0

5、.5ml/kg經背部皮下注射，每周兩次，持續(xù)至處死，注射兩周即四次后接受細胞移植。分離培養(yǎng)MSCs，流式細胞儀鑒定，F(xiàn)e<,2>O<,3>-PLL磁性納米粒子標記后單獨(對照組，n=5)或與硝普鈉(24nmol/100g)混合(實驗組，n=5)經門靜脈植入大鼠肝內。兩組分別于移植前及移植后3 h、1w、2w、4w各時間點行MR肝臟成像，測量肝臟信噪比(signal-to-noise ratio，SNR)。最后一次掃描后將受試大鼠全部處死

6、，剪取肝臟各葉行組織學檢查。 結果：經腸系膜上靜脈注射硝普鈉后10-20分鐘，大鼠門脈內徑較注射前明顯擴張(2.6±0.4 mm vs.1.6±0.3 mm，t=-4.47，P<0.01)，門脈血流量增大(1.54±0.26cm<'2>/s vs.0.71±0.17cm<'3>/s，t=-6.13，P<0.01)。細胞爬片普魯氏藍染色示MSCs的Fe<,2>O<,3>-PLL標記率近100％。MR掃描可見：細胞移植后3 h肝臟T

7、<,2><'*>WI信號明顯下降，對照組低信號區(qū)以肝門周圍為著，信號改變不均勻；實驗組肝葉信號呈彌漫性均勻性減低。移植后3 h、1w、2w，實驗組肝臟SNR明顯低于對照組(3.38±0.99 vs.6.94±1.16，9.43±1.45 vs.13.36±1.32，14.37±1.41 vs.16.88±1.44，t值分別為-5.22，-4.50，-2.78，P值均<0.05)。組織學檢查證實：實驗組鏡下平均每高倍視野約見14±4個普魯