建立穩(wěn)定表達IL-12的小鼠Lewis肺癌細胞系及IL-12活性檢測.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩47頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:白介素-12(interleukin一12,IL-12)是具有抗瘤活性的細胞因子,構(gòu)建能在真核細胞內(nèi)穩(wěn)定表達小鼠白介素-12(murrineinterleukin-12interleukin-12,miL-12)的質(zhì)粒,建立穩(wěn)定表達小鼠IL-12(miL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewislungcarcinoma,LLC)細胞系LLC/miL-12,為進一步研究IL-12的免疫調(diào)節(jié)機制和抗瘤免疫反應奠定基礎。 方法:

2、通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增質(zhì)粒pORF-miL-12(Elasti,全長),雙酶切后將目的片段miL-12連接到真核表達載體pcDNA3.1(+)質(zhì)粒上,mil一12受pcDNA3.1(+)中mCMV啟動子驅(qū)動,將miL-12全長轉(zhuǎn)錄至同一mRNA上,對重組質(zhì)粒進行鑒定后用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染小鼠Lewis肺癌細胞(LLC)測其表達。流式細胞儀(FCM)觀察細胞周期和凋亡,G418篩選獲得陽性克隆后大量培養(yǎng)并檢測miL-12活性。 結(jié)

3、果:PCR成功擴增出miL-12片段,PCR鑒定、酶切鑒定及測序均證實pcDNA3.1(+)一miL-12質(zhì)粒構(gòu)建成功,RT-PCR及ELISA證實重組質(zhì)粒在mRNA及蛋白質(zhì)水平均高表達miL-12。miL-12使LLC細胞周期重新分布,并促進其凋亡。LLC/miL-12細胞培養(yǎng)上清能明顯引起刀豆蛋白A(ConA)激活的小鼠脾細胞增殖。 結(jié)論:pcDNA3.1(+)一miL-12真核表達質(zhì)粒構(gòu)建成功并能在LLC細胞中穩(wěn)定表達,成

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論