MAPKs對NOD小鼠IL-12表達及C57小鼠巨噬細胞發(fā)育的影響.pdf

1、絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)系統(tǒng)是進化中最古老最保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)之一，在免疫應(yīng)答過程中起重要作用。在哺乳動物細胞中主要有三個亞家族，分別為細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)、c-Jun N端激酶(JNK)/應(yīng)激活化蛋白激酶(SAPK)、和p38蛋白激酶。MAPKs通過三肽基序蘇氨酸-Xaa-酉各氨酸發(fā)生雙磷酸化而活化。該三肽基序序列在每個MAPKs中是不同的：ERK(蘇氨酸-/谷氨酸-酪氨酸)；JNK(蘇氨酸-脯氨酸璐氨酸)；和p

2、38(蘇氨酸-甘氨酸_酉各氨酸)。蘇氨酸和酪氨酸的雙磷酸化被保守的蛋白激酶系統(tǒng)調(diào)控。ERK MAPK被MAPK激酶(MKK)MEK 1和MEK 2激活；JNK MAPK被MKK．4和MKK 7激活；p38 MAPK通過MKK 3,MKK 4和MKK 6激活。這些MKKs又依次被不同的MKK激酶(MAPKKK)激活。不同的刺激又可導(dǎo)致MAPKKK的活化。MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路正是通過這種保守的三級酶促級聯(lián)反應(yīng)激活其下游底物，MAPKs是該

3、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的樞紐，激活的MAPKs通過磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子、細胞骨架蛋白及酶類等，參與細胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化及凋亡的調(diào)節(jié)，并與炎癥、腫瘤及其它多種疾病發(fā)生機制密切相關(guān)。 目的： 1：探討NOD小鼠中MAPKs活化與IL-12表達的關(guān)系。 2：探討cAMP對M-CSF誘導(dǎo)MAPKs活化及巨噬細胞發(fā)育的影響。 方法： 1：利用Ⅰ型糖尿病(T1DM)動物模型NOD小鼠，研究了MAPKs在IL-12主要產(chǎn)生細

4、胞中的磷酸化水平，分析該轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與T1DM中IL-12異常表達的關(guān)系，進一步探討了MAPKs在T1DM中異?；罨臋C制。用C57小鼠作為對照，分別得到兩種小鼠的骨髓源巨噬細胞，用姬姆薩染色法在顯微鏡下觀察其形態(tài)的異同；用酶聯(lián)免疫吸附(EUSA)分別測定IL-12的分泌水平以及MAPKs抑制因子預(yù)處理后IL-12的分泌變化；最后利用Western blot檢測在不同刺激因素下，MAPKs的活化方式，比較NOD、C57小鼠的異同，為T1DM

5、的治療提供新的思路。 2：顯微鏡下觀察C57小鼠骨髓源巨噬細胞的形態(tài)；Western blot分析M-CSF對MAPKs活化的影響及cAMP對M-CSF誘導(dǎo)MAPKs活化的影響；FACS分析cAMP對巨噬細胞發(fā)育過程中F4/80和CD14表達的影響。 結(jié)果： 1：NOD小鼠巨噬細胞形態(tài)異常；ELISA結(jié)果顯示NOD小鼠中IL-12異常高表達，加p38MAPK抑制劑后，表達下降；Westernblot結(jié)果顯示NO

6、D小鼠巨噬細胞中，p38 MAPK信號通路異?；罨?，可能和MAPKKK水平有關(guān)。 2：巨噬細胞形態(tài)顯示成功建立巨噬細胞發(fā)育模型；Western blot結(jié)果顯示在不成熟和成熟巨噬細胞中，M-CSF均可以活化ERK、JNK和p38。隨著時間的延長，cAMP抑制M-CSF誘導(dǎo)活化ERK、JNK和p38。FACS結(jié)果顯示用cAMP預(yù)處理的巨噬細胞，其發(fā)育成熟能力減弱。 結(jié)論： NOD小鼠中，p38MAPK異?；罨T導(dǎo)產(chǎn)