大蒜新素對(duì)MCMV感染小鼠IL-12基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)和功能的影響.pdf

1、[目的] ①在整體水平證實(shí)大蒜新素抗巨細(xì)胞病毒活性和治療效應(yīng)； ②探明巨細(xì)胞病毒感染脾細(xì)胞Th1類細(xì)胞調(diào)控因子IL-12基因轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和功能的動(dòng)態(tài)變化及其在CMV逃避免疫機(jī)制中的作用； ③闡明大蒜新素對(duì)MCMV感染小鼠脾細(xì)胞Th1類細(xì)胞調(diào)控因子IL-12基因轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和功能的影響和其在抗MCMV機(jī)制中的作用； [方法] ①M(fèi)CMV感染動(dòng)物模型的建立：MCMV經(jīng)小鼠唾液腺增殖傳毒后，選用幼年小鼠，在

2、不使用免疫抑制劑條件下，建立MCMV全身播散型感染小鼠模型(Smith株)，評(píng)估心、肺、肝、腎等主要臟器的組織病理改變； ②大蒜新素治療劑量及實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)大蒜新素成人中效劑量(120mg/d)換算出小鼠用藥的一般劑量(25mg/kg·d)。實(shí)驗(yàn)共分為大蒜新素治療組、安慰劑組和正常對(duì)照組。在病毒感染和/或藥物處理后3d、5d、7d、10d、14d時(shí)取各組小鼠脾組織樣本； ③RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠脾細(xì)胞IL-12p35

3、和IL-12p40mRNA表達(dá)強(qiáng)度；④雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)各組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清Th1細(xì)胞調(diào)控因子IL-12p70和Th1類細(xì)胞因子IFN-γ的蛋白表達(dá)水平。 [結(jié)果] ①M(fèi)CMV播散型感染模型鼠的肝、肺、腎和心臟出現(xiàn)相應(yīng)的病理?yè)p害； ②MCMV播散型感染模型鼠在感染后第3dIL-12p70表達(dá)顯著增高，但第5d后急劇下降，顯著低于正常小鼠；IFN-γ在感染后第3d增高達(dá)峰值，隨后逐漸下降，在感染后第10d

4、～14d降至正常水平；IL-12p35mRNA水平變化與IL-12p70完全一致；而p40mRNA則從感染第3d開始持續(xù)高水平表達(dá)； ③大蒜新素對(duì)MCMV感染小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL-12p70和IFN-γ表達(dá)的影響：大蒜新素在治療后第3dIL-12p70表達(dá)到峰值，隨后迅速明顯下降，在治療后第5d～14d基本降至正常細(xì)胞水平；IFN-γ在大蒜新素治療第3d達(dá)峰值，第5d稍有下降，但隨后表達(dá)逐漸上調(diào)，在治療后第7d～14d

5、顯著高于安慰劑組和正常對(duì)照組(P＜0.01)； ④大蒜新素對(duì)MCMV感染小鼠脾細(xì)胞IL-12p35和p40mRNA水平的影響：在治療后第3d，大蒜新素治療組IL-12p35mRNA和IL-12p40mRNA水平均達(dá)峰值，與安慰劑組水平相當(dāng)，明顯高于正常細(xì)胞，P＜0.05；隨后二者表達(dá)快速下降，在第5d至第14d穩(wěn)定在正常細(xì)胞水平(P＞0.05)。 [結(jié)論] ①采用小鼠唾液腺內(nèi)傳毒的方法以恢復(fù)MCMVSmith毒株

6、的毒力，有助于建立小鼠巨細(xì)胞病毒全身播散性感染模型，為CMV致病機(jī)制和治療藥物篩選研究提供良好有效的工作平臺(tái)； ②IL-12p35mRNA和IL-12p70水平在MCMV感染5d后持續(xù)明顯下降是感染后期Th1類細(xì)胞因子持續(xù)低表達(dá)、Th1反應(yīng)受抑制的主要原因之一；感染后IL-12p40mRNA持續(xù)高表達(dá)可能導(dǎo)致IL-12p70拮抗劑(p40)2形成增加，后者可進(jìn)一步抑制IL-12功能。抑制IL-12的表達(dá)和功能可能是CMV感染導(dǎo)致

7、機(jī)體Th1/Th2細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)失衡，使宿主特異性細(xì)胞免疫功能降低的原因之一，亦可能是CMV逃避機(jī)體特異性細(xì)胞免疫，持續(xù)感染或長(zhǎng)期潛伏在宿主體內(nèi)并在一定條件下引起病理?yè)p害的又一重要機(jī)制； ③大蒜新素能完全糾正MCMV在感染后第5d～14d誘導(dǎo)的IL-12p70和IL-12p35mRNA表達(dá)下調(diào)以及IL-12p40mRNA表達(dá)上調(diào)；同時(shí)還能持續(xù)上調(diào)感染細(xì)胞表達(dá)IFN-γ，提示其還可能通過(guò)其他途徑促進(jìn)IFN-γ分泌。大蒜新素的上述作用有助