IL-12的抗輻射作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分，IL-12的抗輻射作用及相關(guān)機(jī)制研究
　　rmIL-12對(duì)γ-射線(xiàn)照射后小鼠存活狀況、骨髓造血機(jī)能和體外小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞存活的影響。100只小鼠按體重隨機(jī)分為照射對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、rmIL-12組(200ng/只,100ng/只,50ng/只)共5組,每組20只,雌雄各半。用60Co射線(xiàn)照射源,小鼠全身照射8.0Gy用于存活率實(shí)驗(yàn)研究。50只雌性小鼠,分為同樣5組,全身4.0Gy照射用于對(duì)造血功能影響的研究。均在照

2、射前24h、1h各給藥一次,照射后每天給藥一次,連續(xù)7天,給藥途徑為皮下注射。MTT方法觀(guān)察在不同輻射劑量下rmIL-12對(duì)體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生存的影響。結(jié)果表明,rmIL-12可明顯提高8.0Gy60Coγ射線(xiàn)照射小鼠30天活存率,使生存曲線(xiàn)(KaplanMeier曲線(xiàn))顯著增高及右移;在60Coγ射線(xiàn)輻射劑量為4.0Gy時(shí),rmIL-12對(duì)小鼠的外周血中白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)和網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)計(jì)數(shù)增高和恢復(fù)提

3、前,骨髓DNA含量也顯著高于對(duì)照組;同時(shí)在0.125ng/mL~32ng/mL濃度范圍內(nèi),在體外可觀(guān)察到rmIL-12對(duì)60Coγ射線(xiàn)輻射的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的生存有保護(hù)效應(yīng)。
　　恒河猴20只,分為四組,每組雌雄各半。正常對(duì)照組2只,照射對(duì)照組及rhIL-12低劑量組和高劑量組各6只,后兩組動(dòng)物分別于照射前24h和1h,照射后每天一次,連續(xù)9天皮下注射rhIL-12劑量為5和0.5μg/kg。60Co輻射劑量為3.

4、0Gy(222cGy/min)。受試動(dòng)物輻照后,一般表現(xiàn)和血液系統(tǒng)各指標(biāo)的變化符合骨髓型放射病的特征,主要表現(xiàn)為外周血白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)的下降。試驗(yàn)過(guò)程中未觀(guān)察到受試藥物rhIL-12對(duì)三系細(xì)胞計(jì)數(shù)下降的抑制或者遏制作用,高劑量組甚至加重。但在血象恢復(fù)階段,白細(xì)胞總數(shù)曲線(xiàn),高劑量組高于照射對(duì)照組;網(wǎng)織紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)曲線(xiàn),高、低劑量組均高于照射對(duì)照組。在實(shí)驗(yàn)后期的淋巴細(xì)胞畸變分析,低劑量組動(dòng)物的淋巴細(xì)胞畸變率明顯低于輻射對(duì)照組。

5、
　　rmIL-12能夠提高60Coγ射線(xiàn)輻射下小鼠的存活率以及促進(jìn)造血功能的恢復(fù),對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生存有保護(hù)作用;rhIL-12對(duì)60Co輻射恒河猴所致急性放射病的初步研究,受試藥物對(duì)骨髓造血機(jī)能的恢復(fù)有一定的促進(jìn)作用,對(duì)淋巴細(xì)胞基因組的修復(fù)也有一定的促進(jìn)作用。
　　第二部分，腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6原位模型的建立及ACT-001的抗腫瘤藥效學(xué)及相關(guān)機(jī)制研究
　　ACT-001對(duì)腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抗腫瘤藥效學(xué)及相關(guān)機(jī)

6、制進(jìn)行初步探討研究。利用MTT法檢測(cè)不同濃度的ACT-001對(duì)C6細(xì)胞和U87MG細(xì)胞的體外藥效學(xué)研究;流式細(xì)胞技術(shù)比較兩株細(xì)胞在不同濃度ACT-001作用下,對(duì)細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡的影響;采用C6/Wistar大鼠原位腫瘤模型,對(duì)不同濃度的ACT-001進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤藥效學(xué)研究,觀(guān)察荷瘤鼠的日常表現(xiàn)、體重變化及存活狀況并做病理切片HE染色;最后采用RT-PCR方法檢測(cè)C6細(xì)胞及荷瘤鼠腦組織中相關(guān)基因Nestin以及凋亡基因Bax和B

7、cl-2的表達(dá)情況。
　　MTT結(jié)果顯示,ACT-001對(duì)受試細(xì)胞C6和U87MG的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)呈現(xiàn)出良好的劑量依賴(lài)關(guān)系,重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果一致,受試藥物設(shè)置濃度基本涵蓋了藥物效應(yīng)窗口,半數(shù)抑制濃度(IC50)范圍分別為27.2～28.6μM和20.6～27.9μM。流式細(xì)胞術(shù)分析,隨著ACT-001作用濃度的增加,C6和U87MG細(xì)胞的凋亡率也逐漸增加,同時(shí)還能誘導(dǎo)誘導(dǎo)C6細(xì)胞周期G0/G1、G2/M期阻滯,但不同濃度間差異并不顯著,

8、對(duì)U87MG細(xì)胞周期無(wú)明顯影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,ACT-001能夠抑制C6細(xì)胞在大鼠腦內(nèi)的生長(zhǎng),第一次實(shí)驗(yàn)中ACT-001(80mg/kg和160mg/kg)的抑制率分別為69.4％(P<0.01)和63.9%(P<0.01),模型對(duì)照組死亡5只動(dòng)物的同時(shí),80mg/kg組也死亡1只動(dòng)物,160mg/kg組實(shí)驗(yàn)后期體重也有所下降,并未顯示出良好的量效關(guān)系,因此在第二次試驗(yàn)中ACT-001劑量調(diào)整為25、50、100mg/kg,抑制率分

9、別為59.9%(P<0.01)、78.7%(P<0.001)及87.5%(P<0.001),模型對(duì)照組死亡5只動(dòng)物時(shí),中、低劑量組各死亡1只動(dòng)物,實(shí)驗(yàn)后期體重仍有所增加,既呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系,又增加了動(dòng)物的存活率(P<0.05),HE染色結(jié)果顯示對(duì)照組大鼠顱內(nèi)腫瘤細(xì)胞增殖活躍,邊緣有浸潤(rùn)現(xiàn)象,而ACT-001各給藥組均較對(duì)照組癥狀減輕,基本接近正常。RT-PCR結(jié)果顯示,Quantityone軟件進(jìn)行灰度分析,荷瘤大鼠腦組織高表達(dá)Ne