肌內注射曲安奈德及肉毒毒素誘導兔咬肌萎縮試驗及臨床研究.pdf

1、第一章肌內注射曲安奈德及肉毒毒素誘導兔咬肌萎縮試驗 目的 探討肌內注射曲安奈德及肉毒毒素誘導兔咬肌萎縮的可行性及咬肌的大體形態(tài)改變。 方法 選擇健康成年新西蘭白兔100只，隨機分為4組，每組25只，其中1組為正常對照組，不做任何處理，另外3組分別進行①肉毒毒素試驗(B組)、②曲安奈德試驗(T組)和③曲安奈德+肉毒毒素(BT組)。每只實驗組動物均取一側咬肌作為試驗肌，對側咬肌作自身陰性對照，試驗咬肌內分別注

2、射配制好的肉毒毒素A、曲安奈德或曲安奈德+肉毒毒素，聯(lián)合用藥劑量是單獨用藥劑量的1/2。對側咬肌內注射等量生理鹽水。分別于藥物注射后2、4、8、12、24周時進行咬肌取材，每次各組均取5只，完整切取雙側咬肌，稱新鮮咬肌濕重，并留取部分咬肌組織備查，手術前應用B超于活體上測量咬肌厚度。觀察記錄咬肌大體形態(tài)、厚度、濕重。 結果 1.大體觀察：實驗咬肌基本形態(tài)正常，實驗側咬肌組織形態(tài)、色澤、彈性、質地等均與正常對照組和陰性自身

3、對照咬肌無明顯差別。 2.咬肌厚度：不同時間內正常組與各試驗組的陰性對照側間經隨機設計方差分析結果顯示差異無顯著性意義(P≥0.138)，注射生理鹽水不會造成陰性對照側咬肌厚度改變。各試驗組的陰性對照側咬肌厚度與試驗側間經配對t檢驗有顯著性差異(P均為0.000)，咬肌內注射肉毒毒素、注射曲安奈德或聯(lián)合注射均可引起咬肌厚度的改變，試驗側咬肌厚度明顯減小。 3.咬肌濕重：不同時間內正常組與B、T、BT三組的陰性對照側咬肌濕

4、重間差異均無顯著性(P≥0.103)，局部注射生理鹽水不會造成咬肌濕重改變。各試驗組內試驗側與陰性對照側間差異有顯著性(P≤0.005)，試驗藥物均引起咬肌濕重的改變，試驗側咬肌濕重減小。以各試驗組內試驗側與陰性對照側的濕重差值進行析因方差分析，組間差異有顯著性意義(F=7287.537，P=0.000)，時間差異有顯著性意義(F=202.981，P=0.000)，時間與組別問有交互作用(F=192.184，P=0.000)。

5、結論 曲安奈德、肉毒毒素或聯(lián)合用藥均可引起所注射咬肌的萎縮，聯(lián)合用藥產生的肌萎縮效果最明顯，兩種藥物單獨注射產生的肌萎縮效果無顯著差別。 第二章曲安奈德及肉毒毒素對兔咬肌的組織學影響 目的 探討肌內注射曲安奈德及肉毒毒素后咬肌的組織學、酶組織化學變化。 方法 咬肌取材標本分別進行1.HE染色冷凍切片組織學檢查。2.三磷酸腺苷酶染色冷凍切片光鏡觀察。3.還原型輔酶Ⅰ-四唑氮還原酶染色切片光鏡

6、觀察。4.酶組化染色切片的圖像測量分析。 統(tǒng)計學處理：應用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理，實驗數據以-x±s表示，采用隨機設計資料方差分析及配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 1.組織學檢查結果： HE染色切片檢查顯示各試驗咬肌基本組織結構與對照組間無明顯差異，肌纖維排列整齊，肌纖維變細，細胞核位于肌膜下，未見細胞壞死、變性等病理改變?？v切面肌節(jié)完整清晰，橫切面輪廓基本正常，部分輪廓不

7、規(guī)則。 2.酶組織化學檢查結果： ATP酶染色切片光鏡下檢查，兔咬肌組織中含Ⅰ、Ⅱ(Ⅱa、Ⅲb)型肌纖維，兩種纖維相互混合，肌纖維由大到小依次為Ⅱb型纖維、Ⅱa型纖維、Ⅰ型纖維。試驗咬肌Ⅱ型肌纖維面積較對照組明顯減小，其中以Ⅱb型纖維面積的減小更加顯著，而Ⅰ型肌纖維無明顯改變。 3.圖像分析結果： Ⅰ型肌纖維：各時間點內正常組及各實驗組的陰性對照側間無顯著性差異(P≥0.963)，注射生理鹽水不會造成咬肌

8、Ⅰ纖維的截面積改變。各試驗組內陰性對照側與試驗側間經配對t檢驗，也無顯著性差異，(P≥0.412)，藥物注射也不會造成咬?、裥屠w維的截面積改變。 Ⅱa型肌纖維：所有時間水平的正常組與各試驗組的陰性對照側間無顯著差異(P≥0.963)，認為注射生理鹽水不會引起Ha型肌纖維改變；各試驗組的實驗側與陰性對照側問有顯著性差異(P≤0.041)，三種試驗方法均可引起Ⅱa型肌纖維面積的改變，實驗側咬肌纖維面積減小。 Ⅱb型肌纖維：各

9、時間內正常組與各試驗組的陰性對照側間差異無顯著性意義(P≥0.982)，陰性對照側Ⅱb型肌纖維面積無明顯改變；各試驗組的實驗側與陰性對照側間均有顯著性差異(P≤0.005)，說明三種方法均可引起Ⅱb型肌纖維面積的改變，試驗側Ⅱb型肌纖維面積減小。 從時間變化趨勢看，Ⅱa和Ⅱb肌纖維面積在8～12周之前呈進行性下降趨勢，第12周至第24周無明顯變化，24周時B、T、BT三組試驗側肌纖維Ⅱb型約為陰性對照側咬肌纖維面積的51.41％

10、、47.94％、46.54，Ha型纖維面積減小沒有Ⅱb型纖維明顯，至第24周時Ⅱa型纖維面積約為對照側的78.24％、78.09％、77.49％。 結論 常規(guī)組織學檢查顯示試驗咬肌組織基本正常。試驗因素不改變Ⅰ型肌纖維面積，但會使Ⅱa和Ⅱb型肌纖維萎縮，Ⅱb型肌纖維萎縮較Ⅱa型纖維更加明顯。肌纖維面積變化趨勢是肌纖維面積在8～12周之前持續(xù)減小，之后至24周前無明顯變化。 第三章曲安奈德及肉毒毒素對咬肌細胞超微結

11、構的影響 目的 探討肌內注射曲安奈德及肉毒毒素誘導肌萎縮后肌細胞超微結構的改變 方法 兔咬肌內注射曲安奈德、肉毒毒素或聯(lián)合注射兩種藥物后，分別于第2、4、8、12、24周切取咬肌組織標本，用3％戊二醛固定，制備超薄切片，醋酸鈾和檸檬酸鉛染液雙染色，電子顯微鏡下進行觀察。 結果 對照組：肌原纖維、肌節(jié)、肌管系統(tǒng)等結構完整，排列整齊，細胞核位于肌膜下，線粒體均勻分布在肌原纖維之間。正常對照組與

12、陰性對照組咬肌未見明顯差別。 聯(lián)合試驗組：肌節(jié)結構完整，排列整齊，其間線粒體增多，肥大腫脹，部分線粒體嵴變短、減少、紊亂或消失，糖元顆粒增多；肌原纖維變細。 三組試驗的共同超微結構變化是線粒體增多，腫脹變形，線粒體嵴減少、變短或消失，肌漿內糖原增多。 結論 細胞超微結構的變化可能在一定程度上反映了肌細胞能量代謝、糖代謝和蛋白代謝的改變。肌原纖維蛋白代謝增加，合成減少；線粒體增多可能是代償性地加強有有氧呼吸

13、的結果，之后線粒體嵴減少、紊亂、消失，可能是有氧代謝失代償的表現(xiàn)；糖原顆粒增多可能是糖原代謝障礙障礙的結果，糖原合成增加、分解減少，造成肌漿內糖原顆粒堆積。 第四章曲安奈德及肉毒素治療咬肌肥大的臨床研究 目的 探討肌內注射曲安奈德及肉毒毒素治療咬肌肥大的臨床效果，及其對咬合功能的影響。 方法 選擇單純性良性咬肌肥大或下頜角整形術后仍顯咬肌肥大的患者10人，隨機分為兩組分別接受曲安奈德或肉毒毒素咬肌

14、內注射治療，分別于治療前和治療后1周、1月、3月、6月測量最大咬合力及開口度，治療前及治療后3、6個月應用B超測量咬肌厚度。 結果 治療后面部輪廓改善，肥大的咬肌萎縮明顯，形態(tài)效果滿意。 1.咬合力：兩種藥物對咬合力的影響差異有顯著性(F=34.876，P=0.000)，肉毒毒素對咬合力的影響較曲安奈德明顯；組內效應及交互效應比較，重復測量5個不同時期測量咬合力間有顯著性差異(F=222.128，P=0.000)

15、，狀態(tài)與藥物間有交互作用(F=7.186，P=0.000)，多重比較治療前及治療后不同時間咬合力間均有顯著性差異(P≤0.037)。 2.開口度：兩組間差異無顯著性差異(F=0.002，P=0.964)；組內效應及交互效應比較，重復測量5個不同時間的開口度間差異無顯著性(F=1.037，P=0.403)，藥物與狀態(tài)間無交互作用(F=2.487，P=0.063)。治療對最大開厚度均無影響。 3.咬肌厚度：兩藥的治療效果差異

16、無顯著性意義(F=0.225，P=0.641)。重復測量3個不同狀態(tài)間有顯著性差異(F=512.479，P=0.000)，治療后咬肌厚度逐漸減小；狀態(tài)與藥物間無交互作用(F=1.698，P=0.197)。多重比較治療前及治療后不同時間間均有顯著性差異(P均為0.000)，兩種藥物治療后咬肌厚度均明顯減小。 結論 治療對開口度無影響，對咬合力有明顯影響，肉毒毒素較曲安奈德對咬合力的影響更顯著。兩種藥物均可使咬肌厚度減小，兩

17、者效果無顯著性差異。 全文結論 本研究首次提出并通過動物實驗及臨床研究探討了糖皮質激素治療骨骼肌肥大的可行性，并進一步了解了糖皮質激素及肉毒毒素注射后咬肌組織學、酶組織化學和超微結構改變。結果顯示咬肌內注射曲安奈德及肉毒毒素均可產生明顯的肌萎縮效果，組織學及酶組化研究顯示典型的Ⅱ型肌纖維萎縮，Ⅰ型肌纖維無明顯改變。咬肌細胞超微結構的改變主要表現(xiàn)為早期細胞內線粒體增多肥大、糖原顆粒增多及肌原纖維變細。聯(lián)合注射糖皮質激素與肉