核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(KPNA2)對肝細(xì)胞癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌是全球常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其中肝細(xì)胞癌（以下簡稱肝癌）占原發(fā)性肝癌達(dá)90％以上，在全球癌癥發(fā)病率中居第5位，死亡率居第3位。中國是肝癌高發(fā)區(qū)，發(fā)病人數(shù)占全球的55％，發(fā)病率和死亡率均呈緩慢上升的趨勢，對人民健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。近年來，隨著乙肝攜帶者、肝硬化等高危人群的篩選普查，以及肝癌診斷和治療的進(jìn)步，肝癌患者的療效有所改善，但總體預(yù)后仍然較差，即使是臨床分期較早的小肝癌，術(shù)后總體生存期仍然不理想，而

2、術(shù)后易出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移是影響患者生存的重要因素。因此，進(jìn)一步闡明肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制，尋找影響肝癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)及預(yù)后生存的生物指標(biāo)，對于提高肝癌患者總體療效具有重要的臨床意義。
　　核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（karyopherinα2，KPNA2）是一種具有核定位信號區(qū)域的接頭蛋白，主要功能是介導(dǎo)其他核蛋白進(jìn)入細(xì)胞核，從而發(fā)揮其相應(yīng)的生物學(xué)功能。KPNA2蛋白中心區(qū)域有兩個核定位信號結(jié)合位點(diǎn)，能與具有核定位信號（Nuclear localizati

3、on signal，NLS）的入核蛋白結(jié)合，介導(dǎo)核蛋白入核，從而調(diào)節(jié)效應(yīng)基因或其他信號分子的表達(dá)。近年來，KPNA2被證實(shí)在乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌等多種實(shí)體惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且與患者不良預(yù)后相關(guān)，而在肝癌中涉及較少，具體分子機(jī)制仍不明確。同時有研究表明，在腫瘤形成的早期階段（乳腺原位癌、早期膀胱癌）亦可出現(xiàn) KPNA2的高表達(dá)，并均表現(xiàn)為不良預(yù)后。因此，KPNA2的表達(dá)增加可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要的關(guān)系，并有望

4、成為新的腫瘤治療靶點(diǎn)。
　　研究目的：
　　1、明確 KPNA2蛋白在人肝癌細(xì)胞系、肝癌組織及其匹配癌旁組織中的表達(dá)水平；
　　2、探討 KPNA2蛋白表達(dá)對肝癌患者手術(shù)切除后生存預(yù)測價值；并分析其對輔助判斷缺少預(yù)后指標(biāo)的小肝癌患者預(yù)后情況的應(yīng)用價值；
　　3、探討 KPNA2在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的發(fā)揮的作用，為肝癌侵襲轉(zhuǎn)移提供新的理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、連續(xù)選擇2005年1月至2009年

5、12月間在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受肝癌根治性切除的肝癌患者221例（檢測組），并選取術(shù)后肝癌組織和匹配癌旁肝組織蠟塊切片，通過免疫組織化學(xué)方法檢測肝癌組織及其匹配癌旁肝組織中KPNA2表達(dá)，分析其與臨床病理因素及患者術(shù)后生存的關(guān)系；
　　2、選取4株侵襲性不同的肝癌細(xì)胞系，根據(jù)侵襲性強(qiáng)弱分別是 MHCC-97H、SMMC7721、Hep-G2、Huh7，采用免疫印跡技術(shù)（Western Blot）檢測4株肝癌細(xì)胞系中KPNA2

6、表達(dá)情況；
　　3、連續(xù)選擇2009年1月至2012年12月間在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受肝癌根治性切除的小肝癌患者47例（驗(yàn)證組），分析KPNA2核高表達(dá)在小肝癌患者中是否具有評估術(shù)后早期復(fù)發(fā)的預(yù)測價值；
　　4、運(yùn)用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，Kaplan-Meier法行生存曲線分析，組間差異采用Log-rank法檢驗(yàn)，單因素分析有意義的變量引入Cox模型行多

7、因素分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、KPNA2蛋白在肝癌組織中呈核表達(dá)，且核表達(dá)水平明顯高于癌旁組織；在人肝癌細(xì)胞中，KPNA2蛋白表達(dá)與細(xì)胞侵襲性正相關(guān)；
　　2、KPNA2核高表達(dá)與患者術(shù)前血清 AFP、腫瘤分化、脈管浸潤、BCLC分期和早期復(fù)發(fā)相關(guān)；而與年齡、HBsAg、腫瘤大小等臨床病理因素?zé)o明顯相關(guān)性；
　　3、KPNA2核高表達(dá)的肝癌患者術(shù)后1，2，3年的累積復(fù)發(fā)率較KPN

8、A2核陰性表達(dá)者高；KPNA2核高表達(dá)的肝癌患者1，2，3年總體生存率較KPNA2核陰性表達(dá)者低；多因素結(jié)果顯示，術(shù)前 GGT、腫瘤數(shù)目和KPNA2核高表達(dá)是影響肝癌患者術(shù)后累積復(fù)發(fā)率的獨(dú)立危險因素，腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、脈管浸潤和KPNA2核高表達(dá)是影響肝癌患者術(shù)后總體生存率的獨(dú)立危險因素。肝癌組織中KPNA2核高表達(dá)是影響患者術(shù)后累積復(fù)發(fā)率和總體生存率的獨(dú)立危險因素之一；4、在小肝癌患者中，KPNA2核表達(dá)水平與術(shù)后早期復(fù)發(fā)正相關(guān)；生