淋巴瘤細(xì)胞系SNK-6和Hut-78的體外藥敏實驗及多藥耐藥基因檢測.pdf

1、背景和目的:
　　 T細(xì)胞淋巴瘤是一類來源于T淋巴細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病,是亞洲國家比較常見的淋巴瘤類型。其中,外周T細(xì)胞淋巴瘤如結(jié)外鼻型NK／T細(xì)胞淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤具有高度侵襲性,病程進展快,生存期短,預(yù)后較差等特點,對我國人民的健康和生命構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。化學(xué)治療是目前治療淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的常用手段,但對于T細(xì)胞淋巴瘤的治療尚缺乏理想的治療方案,大多參考B細(xì)胞淋巴瘤的治療方案,常規(guī)應(yīng)用的CHOP方案化療效果欠佳,且容

2、易復(fù)發(fā),另外,盲目的化療往往因藥物選擇性不佳,造成毒副作用較大,治愈率較低。因此,對T細(xì)胞淋巴瘤進行藥物敏感篩選以尋找有效的治療方法,提高治療有效率,具有重要的臨床意義。
　　 耐藥性發(fā)生是腫瘤治療失敗與復(fù)發(fā)的主要原因之一。多藥耐藥的根本原因是多藥耐藥基因mdr-1表達(dá)升高,T細(xì)胞淋巴瘤對化療療效欠佳,可能與腫瘤細(xì)胞mdr-1的過度表達(dá)有一定關(guān)系。本課題所選用的SNK-6和Hut-78細(xì)胞均為來源于相應(yīng)T細(xì)胞淋巴瘤患者的細(xì)胞株,

3、它們mdr-1表達(dá)情況與化療療效是否有一定關(guān)系,值得進一步研究。
　　 本課題以人NK／T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞SNK-6和人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞Hut-78為實驗對象,以細(xì)胞抑制率、半數(shù)抑制濃度即IC50值為實驗指標(biāo),檢測其對12種臨床常用化療藥物的體外敏感性,并用RT-PCR測定了兩株細(xì)胞mdr-1基因的表達(dá)情況,對mdr-1表達(dá)與T細(xì)胞淋巴瘤化療療效之間的關(guān)系進行初步探討。以期研究結(jié)果可以為此型淋巴瘤的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

4、
　　 方法:
　　 1.SNK-6細(xì)胞生長于含10％人AB血清及IL-2的1640培養(yǎng)液中,Hut-78細(xì)胞生長于含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液中,置于37℃,5％CO2,飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。待細(xì)胞生長至對數(shù)期時,收集細(xì)胞,通過MTT法檢測經(jīng)不同濃度化療藥物處理后的SNK-6和Hut-78細(xì)胞的抑制率,并且利用統(tǒng)計學(xué)軟件計算出不同藥物各自的IC50值,從而比較不同化療藥物的敏感性大小。
　　

5、2.逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)RT-PCR法檢測SNK一6和Hut-78細(xì)胞的mdr-1基因mRNA表達(dá)情況。
　　 結(jié)查:
　　 1.對于同一種細(xì)胞來說,在不同藥物濃度的作用下,根據(jù)IC50值大小:SNK-6的體外藥物的敏感性順序依次為吉西他濱>長春新堿>多西他賽>依托泊苷>順鉑>氟尿嘧啶>阿霉素>甲氨蝶呤>門冬酰胺酶>氟達(dá)拉濱>阿糖胞苷；Hut-78的體外藥物敏感性順序依次為吉西他濱>長春新堿>順鉑>阿霉素>甲氨蝶呤>依托泊

6、苷>多西他賽>氟達(dá)拉濱>阿糖胞苷>氟尿嘧啶>門冬酰胺酶。
　　 2.對于同一種藥物來說,分別作用于不同的細(xì)胞,根據(jù)IC50值大小,其體外藥物敏感性也存在一定差異。吉西他濱、長春新堿對SNK-6和Hut-78細(xì)胞均有較強的抑制作用,為高度敏感藥物,組間比較差異無顯著性(P>0.05)。順鉑、依托泊苷、甲氨蝶呤、阿霉素這些藥物對于SNK-6和Hut-78細(xì)胞均屬中度敏感藥物,組間比較差異無顯著性(P>0.05)。多西他賽、門冬酰胺酶

7、、氟尿嘧啶體外對SNK-6相較Hut-78敏感,組間比較差異有顯著性(P<0.05)。氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷對于SNK-6和Hut-78細(xì)胞均為低度敏感或不敏感藥物,組間比較差異有顯著性(P<0.05)。地塞米松對SNK-6和Hut-78細(xì)胞無明顯體外抑制作用。
　　 3.RT-PCR結(jié)果顯示mdr-1在SNK-6中表達(dá)陽性,在Hut-78中表達(dá)較弱。
　　 結(jié)論:
　　 1.不同化療藥物對兩種T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系作用