免疫抑制劑對(duì)白蛋白超載所致的人腎小管上皮細(xì)胞EMT和激素耐藥的預(yù)防和逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、目的：研究免疫抑制劑地塞米松（Dex）、甲基潑尼松龍（MP）、環(huán)孢素A（CsA）對(duì)白蛋白超載條件下腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響、以及對(duì)糖皮質(zhì)激素耐藥相關(guān)指標(biāo)P糖蛋白（P-gp）和糖皮質(zhì)激素受體β（GRβ）表達(dá)的影響。 方法：分別設(shè)立免疫抑制劑預(yù)防EMT實(shí)驗(yàn)和免疫抑制劑逆轉(zhuǎn)EMT實(shí)驗(yàn)。預(yù)防EMT實(shí)驗(yàn)在普通培養(yǎng)基中加入20mg/ml人血清白蛋白（HSA），同時(shí)分別加入10-4M Dex、10-4M MP、200ng/m

2、l CsA共同培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞（HKC）48h；逆轉(zhuǎn)EMT實(shí)驗(yàn)則先給予20mg/ml HSA超載培養(yǎng)HKC48h，然后分別加入10-4M Dex、10-4MMP、200ng/ml CsA繼續(xù)共同培養(yǎng)48h。通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞角蛋白（CK）、Vimentin、P-gp和GRβ的表達(dá)水平。 結(jié)果：①20mg/ml HSA超載可誘導(dǎo)HKC細(xì)胞形態(tài)由鵝卵形向梭形改變，并使HKC細(xì)胞CK

3、表達(dá)明顯減少，Vimentin表達(dá)增加；②免疫抑制劑預(yù)防EMT實(shí)驗(yàn)：Dex、MP可減輕HSA超載誘導(dǎo)HKC細(xì)胞形態(tài)的改變，而CsA不能減輕HSA超載誘導(dǎo)HKC細(xì)胞形態(tài)的改變； Dex和MP可明顯抑制HSA超載誘導(dǎo)HKC細(xì)胞CK表達(dá)水平的下降和Vimentin表達(dá)水平的上升（P<0.05）；而CsA雖在一定程度上抑制了HSA超載誘導(dǎo)HKC細(xì)胞CK表達(dá)水平的下降和Vimentin表達(dá)水平的上升，但差異不顯著（P>0.05）； Dex和MP均

4、顯著上調(diào)HSA超載誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞P-gp、GRβ高表達(dá)，而CsA顯著抑制HSA超載誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞P-gp、GRβ高表達(dá)；②免疫抑制劑逆轉(zhuǎn)EMT實(shí)驗(yàn)：Dex、MP和CsA均可使HSA超載誘導(dǎo)后發(fā)生EMT的HKC細(xì)胞由梭形不同程度地變回鵝卵形，并使CK表達(dá)已減少、Vimentin表達(dá)已增加的HKC細(xì)胞恢復(fù)至CK表達(dá)多、Vimentin表達(dá)少的狀態(tài)（P<0.05）； Dex和MP均使HSA超載所致的HKC細(xì)胞高表達(dá)的P-gp、GRβ進(jìn)一步