心房肽A型受體基因表達及受體鳥苷酸環(huán)化酶活性的調節(jié)研究.pdf

1、目的：1.研究機械牽張誘導心肌細胞肥大過程中，心房肽A型受體基因表達和受體鳥苷酸環(huán)化酶活性的變化。探討機械負荷對心房肽A型受體基因表達和受體鳥苷酸環(huán)化酶活性的影響，了解心房肽A型受體的調節(jié)變化在心肌細胞肥大過程中的作用，進一步闡明心肌細胞肥大的發(fā)生機制。 2.研究腎血管性高血壓大鼠心臟和腎臟的心房肽A型受體蛋白表達以及受體鳥苷酸環(huán)化酶活性，探討高血壓時心房肽A型受體的調節(jié)變化；在此基礎上，進一步研究給予外源性心房肽長期治療高血壓

2、過程中，心臟和腎臟心房肽A型受體蛋白表達與鳥苷酸環(huán)化酶活性的變化，探討外源性心房肽對心房肽A型受體的調節(jié)作用，為長期應用心房肽治療高血壓及其并發(fā)癥提供理論依據(jù)。 方法：1.將體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞置于牽張刺激裝置中，分別施加靜態(tài)和頻率為1Hz的循環(huán)機械牽張，牽張引起心肌細胞發(fā)生20％的應變。同時以未受機械牽張的心肌細胞為對照。分別在牽張刺激12小時，24小時和48小時后，對心肌細胞攝像，用圖象分析系統(tǒng)測定心肌細胞的面積。采用RT

3、-PCR法檢測牽張3、6、12、24、48小時的心肌細胞心房肽A型受體的mRNA表達水平；利用流式細胞術檢測不同時間點心房肽A型受體的蛋白表達量。以10-7mol/LANP作用于心肌細胞，用放射免疫法測定各時間點心肌細胞內cGMP的生成量，檢測牽張刺激不同時間組心肌細胞的鳥苷酸環(huán)化酶活性。 2.用二腎一夾的方法建立腎血管高血壓大鼠模型。建模成功后，植入微囊化hANPcDNA質粒轉染細胞至高血壓大鼠腹腔內，形成長期的體內心房肽給藥

4、系統(tǒng)。實驗分為正常血壓對照組，高血壓組和高血壓心房肽治療組，每組各10只大鼠。治療6周后取出心臟和腎臟，一部分組織做常規(guī)石蠟切片，進行心房肽A型受體的免疫組織化學染色，并用圖象分析法測定特異性染色的灰度值，檢測心房肽A型受體的蛋白表達情況。對另一部分組織勻漿制備膜制劑，用Bradorf法測定膜蛋白的濃度，將10-7mol/LANP加入等量膜制劑中刺激cGMP生成，用放免法測定組織cGMP含量，以未加ANP的膜制劑反應生成的cGMP為基礎

5、對照，檢測各組大鼠心、腎組織的心房肽A型受體的鳥苷酸環(huán)化酶活性。 結果：1.靜態(tài)和循環(huán)機械牽張分別作用于心肌細胞24小時和48小時后出現(xiàn)心肌細胞肥大；心肌細胞受到應變?yōu)?0％的靜態(tài)牽張3小時后，NPR-A基因表達和GC活性增加，牽張6小時后達峰值。牽張24和48小時后，NPR-A基因表達和GC活性下降，有時間依賴性。當心肌細胞受到最大應變?yōu)?0％，頻率為1Hz的循環(huán)牽張刺激6小時后，NPR-A基因表達和GC活性升高，牽張12小時

6、后達峰值，牽張48小時后下降。靜態(tài)牽張和循環(huán)牽張引起心肌細胞NPR-A基因表達和GC活性變化的峰值水平無顯著差異。 2.腎動脈縮窄術后8周，高血壓大鼠心臟和腎臟NPR-A蛋白表達和GC-A活性與正常血壓大鼠相比明顯下降；在腎動脈縮窄術后2周，植入微囊化hANPcDNA質粒轉染細胞持續(xù)給予外源性心房肽治療6周后，NPR-A蛋白表達和GC-A活性恢復至接近正常水平。同時血壓升高明顯減弱，高血壓引起的心臟和腎臟病變明顯減輕。

7、結論：1.機械牽張誘導心肌細胞肥大過程中，NPR-A基因表達和GC-A活性呈雙相性變化，先升高后降低。NPR-A基因表達和GC-A活性與心肌細胞肥大程度之間有負相關性。提示機械負荷可以以時間依賴的方式直接調節(jié)NPR-A基因表達和GC-A活性，NPR-A基因表達和GC-A活性下降促進了心肌細胞的肥大。 2.長期給予外源性心房肽可以通過調節(jié)靶組織NPR-A蛋白表達和GC-A活性，增強心房肽的利鈉、利尿和擴血管效應而有效地治療高血壓及