甜瓜果實(shí)番茄紅素-β環(huán)化酶基因的克隆、表達(dá)與遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、甜瓜(Cucumis melon L.)是世界上重要的園藝作物之一，果實(shí)含有大量的類胡蘿卜素，其中β-胡蘿卜素含量最為豐富。醫(yī)學(xué)研究表明，類胡蘿卜素具有增強(qiáng)人體免疫力、防止心血管疾病和癌癥等方面的重要作用。番茄紅素β環(huán)化酶(LCYB)是甜瓜果實(shí)β-胡蘿卜素合成中的關(guān)鍵限速酶。本論文通過(guò)高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定了不同基因型甜瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中β-胡蘿卜素的含量，克隆了甜瓜果實(shí)Lcyb基因全長(zhǎng)cDNA，并進(jìn)行了表達(dá)特性分析和遺傳轉(zhuǎn)化研究

2、，以期為利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段進(jìn)行甜瓜品質(zhì)改良奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.利用HPLC測(cè)定了兩個(gè)不同基因型的甜瓜品種，即光滑黃皮白色果肉M01-3和綠色網(wǎng)紋橙色果肉‘Homoka’果實(shí)發(fā)育過(guò)程中β-胡蘿卜素含量，結(jié)果表明，β-胡蘿卜素含量在兩個(gè)品種果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的變化趨勢(shì)一致，果實(shí)發(fā)育前期含量很低，接近成熟時(shí)含量達(dá)到最大值，成熟后含量又下降。兩個(gè)品種果實(shí)中β-胡蘿卜素含量差別很大，‘Homoka’在果實(shí)成熟前期β-胡蘿

3、卜素含量最高，是M01-3的十幾倍。
　　 2.根據(jù)GeneBank中登記的其它植物的Lcyb基因保守序列設(shè)計(jì)兼并引物，利用RT-PCR及3’、5'RACE技術(shù)從M01-3甜瓜果實(shí)中克隆到Lcyb基因，該基因全長(zhǎng)1871bp，編碼504個(gè)氨基酸，在GenBank中登記號(hào)為GU457407。
　　 3.利用Real Time RT-PCR進(jìn)行了Lcyb基因在甜瓜不同器官和果實(shí)發(fā)育階段的表達(dá)特性分析，結(jié)果表明，Lcyb基因在