白藜蘆醇對(duì)培養(yǎng)的大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞增殖、谷氨酸代謝功能和S100B蛋白分泌影響的研究.pdf

1、目的：(1)探討不同濃度白藜蘆醇(resveratrol，Res)對(duì)培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞增殖，谷氨酸攝取量，谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)錄水平，谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)含量和活性及谷胱苷肽含量的影響，以探討Res對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞抵抗谷氨酸興奮性毒性作用的機(jī)制。(2)研究不同濃度Res對(duì)培養(yǎng)大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞S100B蛋白轉(zhuǎn)錄和分泌的影響，以進(jìn)一步探討Res對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制，為Res的臨

2、床治療提供理論參考。 方法：原代提取SD大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞，采用膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)抗體進(jìn)行免疫組化鑒定。干預(yù)用的Res用無血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋成不同濃度，終濃度為500、250、100、50、25、10、1μmol/L。對(duì)照組為藥物濃度為0μmol/L的DMEM培養(yǎng)液(含醇量與藥物組相同)。星形膠質(zhì)細(xì)胞加入不同濃度的Res進(jìn)行培養(yǎng)，通過5-溴脫氧

3、尿核苷(BrdU)摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平。采用同位素?fù)饺敕z測(cè)谷氨酸攝取量。ELISA方法檢測(cè)S100B蛋白和谷氨酸代謝指標(biāo)：總谷胱苷肽含量和谷氨酰胺合成酶含量與活性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)GLAST、GLT-1及S100BmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：GFAP免疫組化鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞純度達(dá)95％以上。Res抑制細(xì)胞增殖，并具有劑量和時(shí)間依賴性，即隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)和濃度的增加，抑制作用也明顯增強(qiáng)。Res濃度為25μmol/L和5

4、0μmol/L時(shí)，谷氨酸攝取量和GSH含量顯著增加(P<0.05)。而大于250μmol/L時(shí)，兩者卻降低。但在此高濃度下，GS的細(xì)胞含量與活性卻顯著升高(P<0.05)，而其在濃度為0-100μmol/L時(shí)無顯著變化(P>0.05)。Res濃度小于50μmol/L時(shí)，轉(zhuǎn)運(yùn)體GLT-1和GLAST mRNA表達(dá)無顯著變化(P>0.05)，而濃度大于100μmol/L時(shí)表達(dá)水平降低(P<0.05)。Res作用24h時(shí)，S100B蛋白的細(xì)胞

5、分泌量在濃度為50μmol/L，100μmol/L，250μmol/L時(shí)明顯升高(P<0.05)，同時(shí)S100B mRNA表達(dá)有顯著升高(P<0.05)；而濃度為10μmol/L和25μmol/L時(shí)，S100B mRNA表達(dá)無顯著變化(P>0.05)。 結(jié)論：Res可抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖，對(duì)其谷氨酸代謝具有二元效應(yīng)，即低濃度可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的谷氨酸攝取，增加谷胱苷肽含量和S100B蛋白表達(dá)與分泌，具有神經(jīng)保護(hù)活性，尤其是抵抗谷