漢防己甲素對(duì)離體兔眼角膜基質(zhì)細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討不同濃度漢防己甲素（Tet）對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡的作用情況；對(duì)增殖和凋亡的作用程度進(jìn)行比較；從基因水平探討漢防己甲素的作用機(jī)理。 方法:第一部分1、兔角膜基質(zhì)細(xì)胞的原代、傳代培養(yǎng)及鑒定；2、實(shí)驗(yàn)分為加藥組（Tet質(zhì)量濃度為2μg/ml，3μg/ml和4μg/ml）和對(duì)照組（加入等量的空白培養(yǎng)液），免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定PCNA表達(dá)的情況并計(jì)算增殖率；3、流式細(xì)胞技術(shù)（FCM）測(cè)定細(xì)胞凋亡情況及凋亡率；4、通過繪制增殖曲線

2、和凋亡曲線比較增殖和凋亡的作用程度。 第二部分實(shí)驗(yàn)分為加藥組和對(duì)照組，加藥組Tet質(zhì)量濃度為2μg/ml，對(duì)照組加入空白培養(yǎng)液；RT-PCR檢測(cè)加藥組和對(duì)照組P53和c-myc mRNA表達(dá)的情況。 結(jié)果:第一部分1、Tet質(zhì)量濃度為0～4μg/ml時(shí)，作用48h，隨著Tet濃度的增大，PCNA陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖率呈遞減趨勢(shì)，存在劑量一效應(yīng)關(guān)系（P<0.05）；2、FCM結(jié)果顯示細(xì)胞周期：見G1期細(xì)胞

3、隨Tet濃度增加而增加（P<0.0001）；實(shí)驗(yàn)組見細(xì)胞凋亡峰，隨著Tet的濃度增加，凋亡率也隨濃度升高而升高（P<0.05）；3、Tet對(duì)增殖率影響的曲線斜率絕對(duì)值明顯大于對(duì)凋亡率作用的曲線的斜率絕對(duì)值。 第二部分加藥組和對(duì)照組中均有P53mRNA表達(dá)，與對(duì)照組相比，加藥組P53mRNA表達(dá)明顯增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；加藥組和對(duì)照組中均有c-myc mRNA表達(dá)，與對(duì)照組相比，加藥組c-myc mRNA表達(dá)

4、明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論:1、Tet對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞的PCNA的表達(dá)具有明顯抑制作用，隨濃度增加，PCNA表達(dá)下降，細(xì)胞增殖率下降；Tet使細(xì)胞阻滯在G1期；2、Tet誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，隨濃度增加，凋亡率增加；3、在0～4μg/ml的濃度內(nèi)，Tet對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞同時(shí)具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡雙重作用，但以抑制增殖作用為主；4、Tet加藥組和對(duì)照組中均有P53mRNA和c-myc mRNA表達(dá)，加藥組P53mR