漢防己甲素對離體兔眼角膜基質(zhì)細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討不同濃度漢防己甲素（Tet）對角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖和凋亡的作用情況；對增殖和凋亡的作用程度進(jìn)行比較；從基因水平探討漢防己甲素的作用機(jī)理。 方法:第一部分1、兔角膜基質(zhì)細(xì)胞的原代、傳代培養(yǎng)及鑒定；2、實(shí)驗(yàn)分為加藥組（Tet質(zhì)量濃度為2μg/ml，3μg/ml和4μg/ml）和對照組（加入等量的空白培養(yǎng)液），免疫細(xì)胞化學(xué)測定PCNA表達(dá)的情況并計(jì)算增殖率；3、流式細(xì)胞技術(shù)（FCM）測定細(xì)胞凋亡情況及凋亡率；4、通過繪制增殖曲線

2、和凋亡曲線比較增殖和凋亡的作用程度。 第二部分實(shí)驗(yàn)分為加藥組和對照組，加藥組Tet質(zhì)量濃度為2μg/ml，對照組加入空白培養(yǎng)液；RT-PCR檢測加藥組和對照組P53和c-myc mRNA表達(dá)的情況。 結(jié)果:第一部分1、Tet質(zhì)量濃度為0～4μg/ml時(shí)，作用48h，隨著Tet濃度的增大，PCNA陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖率呈遞減趨勢，存在劑量一效應(yīng)關(guān)系（P<0.05）；2、FCM結(jié)果顯示細(xì)胞周期：見G1期細(xì)胞

3、隨Tet濃度增加而增加（P<0.0001）；實(shí)驗(yàn)組見細(xì)胞凋亡峰，隨著Tet的濃度增加，凋亡率也隨濃度升高而升高（P<0.05）；3、Tet對增殖率影響的曲線斜率絕對值明顯大于對凋亡率作用的曲線的斜率絕對值。 第二部分加藥組和對照組中均有P53mRNA表達(dá)，與對照組相比，加藥組P53mRNA表達(dá)明顯增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；加藥組和對照組中均有c-myc mRNA表達(dá)，與對照組相比，加藥組c-myc mRNA表達(dá)

4、明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論:1、Tet對角膜基質(zhì)細(xì)胞的PCNA的表達(dá)具有明顯抑制作用，隨濃度增加，PCNA表達(dá)下降，細(xì)胞增殖率下降；Tet使細(xì)胞阻滯在G1期；2、Tet誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，隨濃度增加，凋亡率增加；3、在0～4μg/ml的濃度內(nèi)，Tet對角膜基質(zhì)細(xì)胞同時(shí)具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡雙重作用，但以抑制增殖作用為主；4、Tet加藥組和對照組中均有P53mRNA和c-myc mRNA表達(dá)，加藥組P53mR