漢防己甲素抑制兔Epi-LASIK術(shù)后Haze形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察漢防己甲素對(duì)兔微型角膜刀法準(zhǔn)分子激光上皮瓣下角膜磨鑲術(shù)(epipolis laser in situ keratomileusis，Epi-LASIK))術(shù)后角膜上皮下霧狀混濁(Haze)形成的抑制作用并初步探討其作用機(jī)理。 方法：健康新西蘭大耳白兔27只，雙眼行-10.OOD激光切削的Epi-LASIK手術(shù)，采用自身對(duì)照，隨機(jī)分3個(gè)組，分別為陰性對(duì)照(negative control，NC)組、漢防己甲素(Tetra

2、ndrine，Tet)組、艾氟龍(Fluoromethalone，F(xiàn)ML)組，每組18只眼。各組分別于術(shù)后0.5月、1月、2月共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)定期在裂隙燈下進(jìn)行Haze分級(jí)評(píng)估。隨機(jī)選取各組動(dòng)物6只眼，取角膜組織后二等分：一半包埋切片用于組織學(xué)檢測(cè)，另一半凍存用于分子生物學(xué)檢測(cè)。第一部分：取角膜組織切片行光鏡、透射電鏡、膠原纖維染色等方法觀察療效。第二部分：利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymera

3、se chain reaction，RT-PCR)和免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β<,2>和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的表達(dá)水平，研究Tet抑制Haze形成的作用機(jī)理。 結(jié)果：術(shù)后0.5月和1月，Haze分級(jí)水平與Ⅲ型膠原表達(dá)結(jié)果顯示：組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Tet 組和 FML 組Haze分級(jí)水平明顯低于NC組(P<0.01)，但 Tet組和 FML 組相比，差

4、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)；術(shù)后2月組間整體比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Ⅰ型膠原在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)，組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；HE 染色和透射電鏡檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組不同時(shí)間點(diǎn)上皮層結(jié)構(gòu)清晰完整，而 Tet組和FML 組上皮下手術(shù)區(qū)前基質(zhì)層增生反應(yīng)程度明顯弱于NC組，提示這兩種藥物對(duì)成纖維細(xì)胞的增生均有抑制作用。 RT-PCR檢測(cè)顯示：術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)Tet組和FML 組 TGF-β<,2>mRNA的表達(dá)水平均明

5、顯低于NC組(P<0.01)，但 Tet 組和 FML 組之間TGF-β<,2>mRNA的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；術(shù)后0.5月Tet組和 FML 組CTGFmRNA的表達(dá)水平均明顯低于NC組(P<0.01)，但Tet組和FML組之間CTGFmRNA的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.01)。免疫組化檢測(cè)顯示：術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)Tet組和FML組TGF-β<,2>、CTGF的表達(dá)水平均明顯低于NC組(P<0.01)，但Tet組和FML組之間TGF-β