不同月齡兔椎間盤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá).pdf

1、目的：觀察不同月齡新西蘭大白兔椎間盤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)表達(dá)的變化情況，探討它們與椎間盤退變的關(guān)系。
　　方法：
　　(1)40只健康新西蘭大白兔，按1、3、6、9、12、18、24及30月齡，分成8個(gè)月齡組，每組5只。1、3和6為低月齡組(生長(zhǎng)期)，9和12為中間月齡組(成熟期)，18、24和30為高月齡組(退變期)。
　　(2)取兔椎間盤(L5/6、L6/7和L7/

2、S1)組織，室溫下在4％的多聚甲醛溶液中固定3d，Von Ebner法脫鈣1周，常規(guī)石蠟包埋，切片。
　　(3)行HE染色觀察各月齡兔椎間盤組織結(jié)構(gòu)情況，行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)VEGF和bFGF的表達(dá)情況。
　　(4)應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定染色陽(yáng)性細(xì)胞的累積光密度值(integrated optical density，IOD)，以IOD值的高低顯示bFGF和VEGF表達(dá)的強(qiáng)弱情況。
　　結(jié)果：
　　(1)HE染色

3、光鏡檢測(cè)結(jié)果：低月齡組兔整個(gè)椎間盤組織結(jié)構(gòu)十分清晰，纖維環(huán)完整致密，膠原纖維走形有序，髓核與纖維環(huán)界限清楚，髓核內(nèi)細(xì)胞較小，呈圓形和類圓形，數(shù)量較多，軟骨終板結(jié)構(gòu)清晰，軟骨細(xì)胞較多，增生活躍。中間月齡組纖維環(huán)結(jié)構(gòu)完整，膠原纖維增大增粗，細(xì)胞形態(tài)較低月齡增大，細(xì)胞數(shù)量較低月齡組明顯減少。高月齡纖維環(huán)膠原纖維排列紊亂，出現(xiàn)縫隙，并可見(jiàn)纖維斷裂或缺失，隨著月齡的增加組織結(jié)構(gòu)紊亂的程度逐漸加重；髓核內(nèi)膠原排列紊亂，基質(zhì)降解明顯，細(xì)胞變大變圓，呈

4、類軟骨樣，并且細(xì)胞群集，周圍形成大量基質(zhì)。軟骨終板結(jié)構(gòu)紊亂，鈣化嚴(yán)重。在30月齡組椎間盤組織破壞比較嚴(yán)重，椎間盤組織中可見(jiàn)散在鈣化灶。
　　(2)VEGF在椎間盤組織中的表達(dá)變化：低月齡兔纖維環(huán)及髓核內(nèi)細(xì)胞有陽(yáng)性表達(dá)，纖維環(huán)周圍及軟骨終板的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性；中間月齡較前低月齡的VEGF表達(dá)有所下降，呈逐漸減弱趨勢(shì)，陽(yáng)性表達(dá)主要集中在纖維環(huán)周圍部位血管內(nèi)皮細(xì)胞，軟骨終板、髓核內(nèi)幾乎看不到陽(yáng)性細(xì)胞；高月齡組表達(dá)又出現(xiàn)逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，纖

5、維環(huán)內(nèi)纖維細(xì)胞、髓核內(nèi)類軟骨細(xì)胞都呈陽(yáng)性表達(dá)，尤其是30月齡組椎間盤中大量出現(xiàn)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
　　(3)bFGF在椎間盤組織中的表達(dá)變化：bFGF在低月齡兔纖維環(huán)最外圍均勻表達(dá)，染色比較重，纖維環(huán)外圍血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿表達(dá)陽(yáng)性，軟骨終板中的軟骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)。中間月齡的纖維環(huán)中bFGF染色較低月齡組逐漸變淺，軟骨終板表達(dá)減弱，髓核中幾乎見(jiàn)不到陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物。高月齡兔纖維環(huán)周圍的類軟骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中表達(dá)

6、逐漸增強(qiáng)，特別是在纖維環(huán)的前部圓形的類軟骨細(xì)胞和新生成的血管內(nèi)皮細(xì)胞中bFGF高度表達(dá)；髓核類軟骨細(xì)胞也呈陽(yáng)性表達(dá)，并隨月齡增大而逐漸增強(qiáng)。
　　(4)免疫組化顯示，VEGF和bFGF的IOD值在1月齡組表達(dá)最高，IOD值分別是57.67和38.22，從3，6，9月齡逐漸下降，在12月齡組左右表達(dá)最低，其IOD值分別是12.41和7.47，以后在18，24月齡又逐漸上升，到30月齡組又表達(dá)較高，IOD值則分別為37.54和27.9

7、3。VEGF和bFGF在低月齡組和高月齡組的IOD值與中間月齡組的IOD值相差非常顯著(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1)隨著月齡的增加，椎間盤中各組織結(jié)構(gòu)成分發(fā)生從生長(zhǎng)、成熟到退變的相應(yīng)變化。
　　(2)隨著月齡的改變，VEGF和bFGF的表達(dá)都經(jīng)歷了從有到無(wú)，再?gòu)臒o(wú)到有的變化，它們的表達(dá)強(qiáng)度也都隨著月齡從強(qiáng)到弱，再?gòu)娜醯綇?qiáng)。
　　(3)隨著月齡的增加，VEGF和bFGF的表達(dá)和椎間盤組織結(jié)構(gòu)的變化具有相