以改造隱性表位為基礎(chǔ)的HIV復(fù)合多表位疫苗的構(gòu)建及其免疫應(yīng)答分析.pdf

1、艾滋病(AIDS)在世界上流行已經(jīng)將近30年了，到目前為止，人類無(wú)論是在治療上還是在預(yù)防上都沒(méi)有找到徹底消滅HIV的方法，因此，研究有效的預(yù)防性或治療性疫苗迫在眉睫，用以防止HIV感染以及減少AIDS的發(fā)病。
　　CD8+T細(xì)胞在HIV感染早期發(fā)揮重要作用，但是由于HIV在壓力選擇下容易發(fā)生突變，可以逃避特異性的CTL反應(yīng)，而HIV-1gag、pol序列是其重要的蛋白組成部分，具有相對(duì)保守的序列，選擇其中的表位可能突破因高突變導(dǎo)致

2、的免疫清除這一障礙。本研究旨在探索以改造隱性表位為基礎(chǔ)，同時(shí)選擇具有顆粒樣結(jié)構(gòu)的HIVp24蛋白作為外源抗原支架載體系統(tǒng)，依據(jù)其氨基酸序列構(gòu)建HIV復(fù)合多CTL表位基因，制備核酸及蛋白疫苗，免疫轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，激發(fā)特異性CTL反應(yīng)。
　　傳統(tǒng)上對(duì)低親和力表位有一定忽視，修飾低MHC親和力表位可以突破性提高其免疫原性，并且誘導(dǎo)發(fā)生強(qiáng)烈而耐受突變的CD8+T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)，為研制安全有效的HIV預(yù)防/治療性疫苗提供新途徑。
　　

3、DNA疫苗是含有編碼目的抗原蛋白基因的雙鏈DNA分子(如質(zhì)粒)，將其直接注射到體內(nèi)，可以通過(guò)體內(nèi)細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原蛋白誘導(dǎo)相應(yīng)的免疫反應(yīng)。將構(gòu)建的HIV復(fù)合多CTL表位克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，同過(guò)轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL-10并擴(kuò)菌，通過(guò)大提質(zhì)粒，獲得能夠達(dá)到一定劑量的含有目的基因的DNA疫苗。
　　將構(gòu)建好的HIV復(fù)合多CTL表位克隆入原核表達(dá)載體pET32a，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21，IPTG誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)有目的蛋白的過(guò)表

4、達(dá)，采用包涵體純化的方法對(duì)目的蛋白經(jīng)行純化，因?yàn)槭窃谧冃詶l件下純化的蛋白，還需要對(duì)蛋白進(jìn)行復(fù)性，以使得蛋白更接近天然狀態(tài)下的活性和結(jié)構(gòu)，這樣就制備了蛋白亞單位疫苗。
　　本研究選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為BALA/c小鼠和HHD-2小鼠，按照單一DNA疫苗、單一蛋白疫苗、單一重組腺病毒疫苗(重組腺病毒疫苗由本室李英輝博士構(gòu)建，本文不再贅述)以及復(fù)合疫苗免疫的方案對(duì)上述小鼠進(jìn)行免疫。通過(guò)檢測(cè)抗體以及細(xì)胞因子、細(xì)胞毒等體液和細(xì)胞免疫兩個(gè)方面來(lái)分析