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文檔簡介
1、人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)的病原體,該病毒自第一次被發(fā)現(xiàn)以來一直是困擾人類健康的重大問題。雖然抗逆轉錄病毒療法(antiretroviral therapy, ART)大大改善了艾滋病患者的生存質量,但ART療法會造成耐藥毒株的出現(xiàn)、同時長期服用藥物會引起副作用,導致嚴重的
2、經(jīng)濟負擔。研發(fā)有效的預防和治療性疫苗一直是防控 HIV感染和治療艾滋病人的目標。然而目前HIV-1疫苗研發(fā)仍然面臨許多重大難題。首先HIV-1極易發(fā)生突變并可通過多種方式逃避機體免疫系統(tǒng),這為疫苗的研發(fā)帶來較大的挑戰(zhàn)。再者不同種族人群MHC免疫限制性的差別也影響疫苗誘導的免疫應答。
本課題組前期通過分析我國人群的MHC免疫限制性特征和目前我國HIV主要流行株特征,設計表達了一種針對中國人MHC限制性特點和HIV-1流行特征的多
3、表位蛋白候選疫苗(命名為MEP1)。本研究將對重組MEP1蛋白疫苗誘導的免疫反應特征進行系統(tǒng)研究,并探索Th表位在MEP1蛋白誘導的免疫應答中的作用。
1、HIV-1多表位疫苗MEP1的免疫特征研究
?。?)免疫次數(shù)對重組蛋白MEP1誘導的免疫應答的影響:將MEP1和鋁鹽佐劑免疫6-8周雌性BALB/c小鼠,比較單次及加強免疫誘導的體液以及細胞免疫。結果表明,在三免后兩周(初免后十周),加強免疫其誘導的抗MEP1抗體I
4、gG、IgG1和IgG2a以及細胞免疫(IFN-γ、IL-4),均顯著高于單次免疫。說明加強免疫可以誘導小鼠產(chǎn)生更高水平的免疫應答。
?。?)重組蛋白MEP1誘導的早期免疫應答特征研究:以MEP1和鋁鹽佐劑通過肌肉途徑免疫小鼠,PBS作為對照。免疫后第10天,檢測其體液(抗體IgM, IgG及其亞類)以及細胞免疫(IFN-γ、IL-4)。結果表明,早期免疫MEP1可以誘導產(chǎn)生一定水平的IgM抗體,而IgG及其亞類則未能檢出;其誘
5、導的細胞免疫(IFN-γ和IL-4)接近三免后兩周水平。說明MEP1在免疫早期即可誘導較強的細胞免疫。
?。?)重組蛋白MEP1誘導的長期免疫應答特征研究:為了探究MEP1在小鼠體內(nèi)誘導的長期免疫應答特征,小鼠三次免疫后,不同時間(初免后0、4、6、10、14、18、22、24、40、44、48、52周)采集小鼠血清進行ELISA檢測,并且在不同時間點(初免后1.5、10、14、24、44、52周)處死部分小鼠取脾進行ELISP
6、OT檢測。結果發(fā)現(xiàn)抗體水平在三免后兩周達到峰值,并且一直維持在較高水平;細胞免疫在初免后10天即達到較高水平,并且維持到52周。結果表明,MEP1可以誘導長期的高水平免疫應答。
?。?)重組蛋白MEP1在老齡鼠中誘導的免疫應答特征研究:為了觀察MEP1能否在老齡鼠體內(nèi)誘導有效的免疫應答,選取64-66周雌性BALB/c小鼠,三免后兩周檢測其體液及細胞免疫。結果表明,MEP1在老齡鼠中可以誘導較高水平的抗體和細胞免疫。說明MEP1
7、在老齡鼠中同樣具有良好的免疫原性。
2、Th表位在重組蛋白MEP1中的作用研究
(1)MEP1-CTL-E蛋白的表達及鑒定:構建不含 Th表位的重組質粒 pQE30- MEG1-CTL-E,利用SDS-PAGE及Western blot鑒定其表達,Ni+柱親和層析純化,透析復性獲得純度較高、特異性好的MEP1-CTL-E蛋白。
?。?)MEP1-CTL-E與MEP1誘導的免疫應答的比較研究:以MEP1-CTL
8、-E和鋁鹽佐劑三次免疫BALB/c小鼠,MEP1為對照組,分別觀察其在三免后兩周以及長期的體液及細胞免疫應答,通過比較二者誘導的免疫應答的異同,獲得 Th表位在MEP1誘導的免疫應答中的作用。結果表明,MEP1-CTL-E在三免后兩周誘導的抗體水平顯著低于MEP1,細胞免疫應答水平則無顯著差別,說明Th表位可以增強小鼠針對 MEP1-CTL-E誘導的體液免疫應答。長期觀察結果表明,與MEP1-CTL-E相比,含有Th表位的MEP1可以較
9、早誘導抗體產(chǎn)生,其抗體水平較高,而且抗體維持時間較長,細胞免疫應答水平則無顯著差別。以上結果表明Th表位有助于MEP1蛋白誘導較早的、長期以及高水平的體液免疫應答。3、結論
HIV-1多表位蛋白疫苗MEP1具有較好的免疫原性,免疫次數(shù)是影響其免疫原性的重要因素。MEP1不但可以誘導較高水平的早期免疫應答,而且可以誘導長時間、高水平的免疫應答(至少一年)。更為重要的是,MEP1蛋白在老齡鼠中也可以誘導較高水平的免疫應答。Th表位
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