腎安提取液對糖尿病腎病小鼠腎臟保護作用及TGF-β1表達與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、本課題以成功建立糖尿病腎病(DN)小鼠為動物模型，從血、尿生化學、腎臟病理組織學、分子生物學等方面對腎安提取液進行研究，旨在探討腎安提取液防治DN的作用及可能機制。
　　 實驗一
　　 目的：建立DN小鼠動物模型。
　　 方法：以C57BL/6小鼠為研究對象，予以腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，150mg·kg-1)，觀察小鼠一般情況、血糖、尿蛋白、腎質(zhì)量/體質(zhì)量(KW/BW)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及

2、腎組織光鏡、透射電鏡下的病理變化。
　　 結(jié)果：與正常對照組比較，模型組小鼠體重明顯下降(P＜0.01)，第3天即開始血糖持續(xù)性升高(P＜0.01)，1周后出現(xiàn)蛋白尿，4周后BUN、Scr升高(P＜0.01)。KW/BW明顯升高(P＜0.01)，光鏡下顯示，腎小球肥大，系膜區(qū)增寬，基質(zhì)增多，腎小球硬化指數(shù)增加(P＜0.05，P＜0.01)；電鏡下顯示，足突增寬、扁平、融合，足細胞減少，腎小球基底膜(GBM)裸露，GBM明顯增厚(

3、P＜0.05，P＜0.01)。
　　 結(jié)論：提示腹腔注射STZ(150mg·kg-1)能成功誘導(dǎo)C57BL/6小鼠DN模型。
　　 實驗二
　　 目的：探討腎安提取液對DN小鼠生化指標的影響。
　　 方法：將C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組、模型組、厄貝沙坦組、腎安低、中、高劑量組(各9只)，各藥物干預(yù)組分別給予厄貝沙坦10mg/kg、腎安提取液(由黃芪甲苷、淫羊藿苷和1，8二羥基葸醌組成)2.272

4、mg/kg、4.544mg/kg、9.088mg/kg灌胃，定期檢測血糖、尿蛋白、BUN、Scr。
　　 結(jié)果：與正常對照組比較，其余各組小鼠血糖均明顯升高(P＜0.01)，隨著時間延長，各藥物干預(yù)組血糖無降低，與模型組無差異(P＞0.05)；與模型組比較，各藥物干預(yù)組尿蛋白定量明顯減少(P＜0.01)，腎安高劑量組與厄貝沙坦組無顯著性差異(P＞0.05)；第4周未，與模型組比較，各藥物干預(yù)組BUN明顯降低(P＜0.05，P＜0

5、.01)，腎安高劑量組及厄貝沙坦組Scr顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，腎安高劑量組BUN顯著低于厄貝沙坦組(P＜0.05)，Scr兩組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：腎安提取液能減少DN小鼠尿蛋白排出，降低BUN、Scr，對DN腎功能具有良好的保護作用，但無降血糖作用。
　　 實驗三
　　 目的：探討腎安提取液對DN小鼠腎臟組織形態(tài)學影響。
　　 方法：分組及給藥方法同實驗二；采用

6、KW/BW、腎小球硬化指數(shù)、纖粘連蛋白(FN)半定量積分、GBM厚度等為觀察指標。
　　 結(jié)果：腎安各劑量組KW/BW明顯改善(P＜0.05，P＜0.01)，腎安中、高劑量組與厄貝沙坦組無顯著差異(P＞0.05)；光鏡下腎安各劑組腎組織病理變化較模型組明顯減輕，腎小球硬化指數(shù)明顯改善(P＜0.05，P＜0.01)，腎安中、高劑量組腎小球硬化指數(shù)與厄貝沙坦組比較無顯著差異(P＞0.05)；腎安各劑量組FN表達呈不同程度減弱(P＜0

7、.05，P＜0.01)，腎安高劑量組與厄貝沙坦組無顯著性差異(P＞0.05)；電鏡下腎安各劑量組超微結(jié)構(gòu)明顯改善，各組GBM增厚明顯減輕(P＜0.05，P＜0.01)，腎安中、高劑量組GBM厚度與厄貝沙坦組無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：腎安提取液能抑制DN小鼠腎組織FN蛋白表達，改善腎小球肥大，減少ECM積聚，抑制GBM增厚，減輕足細胞損傷，延緩腎小球硬化。
　　 實驗四
　　 目的：探討腎安提取液對

8、DN小鼠腎臟轉(zhuǎn)錄活化蛋白-1(AP-1)及TGF-β1mRNA及蛋白表達的影響。
　　 方法：腎組織標本取材于生化學研究部分，分組方法相同；采用免疫印跡法檢測AP-1蛋白含量、實時熒光定量PCR檢測TGF-β1mRNA表達及免疫組化檢測TGF-β1蛋白含量。
　　 結(jié)果：腎安提取液各組AP-1(c-Jun亞基)蛋白顯著低于模型組(P＜0.01)，腎安高劑量組與厄貝沙坦組AP-1(c-Jun亞基)蛋白表達無顯著性差異(P＞

9、0.05)；腎安各劑量組TGF-β1mRNA表達及蛋白含量顯著低于模型組(P＜0.01)，腎安高劑量組與厄貝沙坦組TGF-β1mRNA表達及蛋白含量無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：腎安提取液能明顯抑制DN小鼠腎組織AP-1蛋白和TGF-β1表達。
　　 實驗五
　　 目的：探討腎安提取液對DN小鼠腎皮質(zhì)p38絲裂原活化的蛋白激酶(MAPK)mRNA及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和Smad

10、7蛋白表達的影響。
　　 方法：腎組織標本取材于生化學研究部分，分組方法相同；采用實時熒光定量PCR檢測p38MAPK mRNA表達，免疫組化法半定量檢測p-p38MAPK和Smad7蛋白含量。
　　 結(jié)果：腎安提取液各組腎皮質(zhì)p38MAPK mRNA表達顯著低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，腎安高劑量組與厄貝沙坦組無顯著性差異(P＞0.05)；腎安提取液各組腎皮質(zhì)p-p38MAPK蛋白相對含量顯著低于模型組(P

11、＜0.01，P＜0.05)；腎安高劑量組與厄貝沙坦組無顯著性差異(P＞0.05)；腎安提取液各組腎皮質(zhì)Smad7蛋白相對含量顯著低于模型組(P＜0.01)；腎安高劑量組與厄貝沙坦組無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：腎安提取液能抑制DN小鼠腎組織p38MAPK mRNA、p-p38MAPK及Smad7蛋白表達。
　　 綜上所述，腎安提取液能減少DN小鼠尿蛋白排出，改善DN腎功能，減輕DN小鼠腎組織病理變化，延緩腎