化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對(duì)腎組織TGF-β1-Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:采用高脂飼料飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）腹腔注射建立糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠模型，予化瘀通絡(luò)中藥進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)觀察大鼠的一般情況、血生化指標(biāo)、血流變、24小時(shí)尿蛋白定量、腎臟病理變化、腎組織中TGF-β1/Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化，來(lái)探討化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）大鼠腎臟的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法

2、:清潔級(jí)健康雄性SD大鼠65只，體重100g±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。隨機(jī)選取10只為正常對(duì)照組(CG)給予普通飼料飼養(yǎng)，剩余55只給予高脂飼料飼養(yǎng)。飼養(yǎng)4周后，從55只大鼠中隨機(jī)選取10只為高脂組(HG)，其余45只大鼠為造模組，造模大鼠禁食12小時(shí)以上按40mg/kg腹腔注射STZ，72小時(shí)后測(cè)血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功，72小時(shí)內(nèi)死亡4只，72小時(shí)后血糖不達(dá)標(biāo)3只予以剔除，繼予高脂飼料飼養(yǎng)。將成模大鼠隨機(jī)分為模型組(

3、MG)12只、化瘀通絡(luò)中藥組(ZG)13只、厄貝沙坦組(IG)13只。各組給予相應(yīng)藥物灌胃，每日一次，連續(xù)16周。16周末收集24小時(shí)尿液，測(cè)24小時(shí)尿量、24小時(shí)尿蛋白定量、飲水量、攝食量;大鼠禁食12小時(shí)以上，稱量體重，麻醉大鼠，剖開腹腔，腹主動(dòng)脈取血檢測(cè)血液指標(biāo);留取腎組織用于western-blotting、 Real-time PCR、免疫組化及光鏡電鏡的病理檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠一般情況的比較正常對(duì)

4、照組及高脂組大鼠一般情況良好;造模各組大鼠均出現(xiàn)明顯多飲、多食、多尿癥狀，其中以模型組表現(xiàn)最為突出。造模第8周末，M組、Z組、I組各有1只血糖不達(dá)標(biāo)，予以剔除;實(shí)驗(yàn)期間M組死亡3只，I組死亡3只，Z組死亡2只。
　　2.各組大鼠體重及腎臟肥大指數(shù)的比較與正常對(duì)照組比較，模型組及兩治療組體重明顯減輕，腎臟肥大指數(shù)明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，兩治療組體重明顯增加，腎臟肥大指數(shù)明顯下降(P＜0.05)。
　　3.各組大

5、鼠攝食量、飲水量、尿量的比較與正常對(duì)照組比較，造模各組攝食量、飲水量、尿量均明顯增多(P＜0.05)，高脂組飲水量、尿量明顯減少(P＜0.05);與模型組比較，兩治療組尿量明顯減少(P＜0.05)，中藥組比模型組飲水量明顯減少(P＜0.05)，厄貝沙坦組與模型組飲水量無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　4.24小時(shí)尿蛋白定量(24h UTP)的比較與正常對(duì)照組比較，造模各組24hUTP明顯增多(P＜0.05);與模型組比較，兩治療組

6、24hUTP均明顯減少(P＜0.05);中藥組與厄貝沙坦組比較24hUTP明顯減少(P＜0.05)。
　　5.各組大鼠血生化指標(biāo)的比較
　　5.1 各組大鼠空腹血糖(FBG)的比較與正常對(duì)照組比較，高脂組與造模各組血糖均明顯升高(P＜0.05);與高脂組比較，造模各組血糖明顯升高(P＜0.05);造模各組之間血糖無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　5.2 各組大鼠膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)的

7、比較與正常對(duì)照組比較，模型組及兩治療組TC、TG、LDL水平均明顯升高(P＜0.05)，高脂組比正常組TC、LDL明顯升高(P＜0.05);與高脂組比較模型組TC、TG、LDL均明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，兩治療組TG及LDL明顯下降(P＜0.05)，厄貝沙坦組TC明顯下降(P＜0.05)，中藥組與模型組比較TC無(wú)明顯差異(P＞0.05);中藥組與厄貝沙坦組比較，TC、LDL明顯升高(P＜0.05)，TG明顯下降(P＜0.0

8、5)。
　　5.3 各組大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）的比較與模型組比較，其余各組Scr水平均明顯低于模型組(P＜0.05);與正常組比較，模型組及兩治療組BUN明顯升高(P＜0.05)，中藥組比模型組BUN明顯下降(P＜0.05)，厄貝沙坦組與模型組BUN無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　6.各組大鼠血流變的比較與正常對(duì)照組比較，模型組及兩治療組血漿粘度及全血粘度明顯升高(P＜0.05);與高脂組比較，模型組血漿粘

9、度及全血粘度均明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，兩治療組血漿粘度及全血粘度明顯下降(P＜0.05);兩治療組之間比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　7.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　7.1 光鏡觀察正常對(duì)照組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰正常;模型組大鼠腎小球肥大，腎小囊呈裂隙狀，甚至出現(xiàn)球囊粘連，基底膜增厚，系膜基質(zhì)增生;兩治療組病理改變較模型組明顯減輕。
　　7.2 電鏡觀察正常對(duì)照組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰正常;模型組大鼠腎小球毛細(xì)

10、血管基底膜增厚，系膜基質(zhì)增多，足細(xì)胞足突部分融合;與模型組相比，兩治療組病理改變明顯減輕。
　　8.免疫組化檢測(cè)腎組織TGF-β1的表達(dá)結(jié)果顯示，TGF-β1主要表達(dá)于腎小球及腎小管上皮細(xì)胞。與正常組比較，模型組表達(dá)明顯增多(P＜0.05）;與模型組比較，中藥組及厄貝沙坦組表達(dá)明顯減少(P＜0.05)。
　　9.Real-time PCR檢測(cè)腎組織TGF-β1、Smad2、Smad7 mRNA的表達(dá)與正常組比較，造模各組TG

11、F-β1 mRNA的表達(dá)明顯增加(P＜0.05），模型組及厄貝沙坦組Smad2 mRNA的表達(dá)明顯增加（P＜0.05）;與模型組比較，兩治療組TGF-β1、Smad2 mRNA的表達(dá)明顯減少(P＜0.05）。高脂組及造模各組與正常組相比Smad7 mRNA的表達(dá)明顯減少(P＜0.05）;兩治療組與模型組相比Smad7 mRNA的表達(dá)明顯增多（P＜0.05）。
　　10.Western-blotting檢測(cè)腎組織TGF-β1的表達(dá)與

12、正常組比較，模型組TGF-β1蛋白的表達(dá)顯著增加(P＜0.05）;與模型組比較，中藥組及厄貝沙坦組TGF-β1蛋白的表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.化瘀通絡(luò)中藥可以改善DN大鼠一般情況、降低24小時(shí)尿蛋白總量、改善脂質(zhì)代謝紊亂、降低血肌酐及尿素氮水平、改善血液高黏狀態(tài)、減輕腎臟病理改變，對(duì)DN大鼠腎臟具有保護(hù)作用。
　　2.化瘀通絡(luò)中藥可以下調(diào)TGF-β1、Smad2表達(dá)水平，上調(diào)Smad7表達(dá)水平