蔥地種蠅感覺神經(jīng)元膜蛋白SNMP2的鑒定與組織分布.pdf

1、蔥地種蠅Delia antiqua(Meigen)又稱“蔥蠅”，是我國重要的根蛆類地下害蟲，幼蟲俗稱“蒜蛆”，與韭菜遲眼蕈蚊Bradysia odoriphaga(Yang et Zhang)幼蟲相似，但蟲體較大。幼蟲鉆蛀為害，取食寄主植物地下部分，造成根部腐爛，發(fā)生嚴重時可將寄主植物地下部分蛀空，導(dǎo)致植株死亡。由于蔥蠅在地下為害作物根部，防治困難，長期使用化學(xué)藥劑不僅增加種植成本，還容易造成環(huán)境污染。昆蟲通過靈敏的嗅覺來感知同種昆蟲釋

2、放的信息素和寄主植物揮發(fā)物。利用昆蟲的嗅覺功能防治害蟲己在多種昆蟲上得到實踐。
　　嗅覺神經(jīng)元膜蛋白(Sensory neuron membrane proteins，SNMPs)是在昆蟲嗅覺器官中分布的嗅覺功能蛋白，與哺乳動物CD36蛋白家族同源，在氮端和碳端分別包含一個跨膜區(qū)域。本研究通過分析蔥蠅轉(zhuǎn)錄組，設(shè)計特異性引物擴增得到了一個SNMP基因開放閱讀框，并通過RT-PCR技術(shù)研究了該基因在不同組織的表達情況。主要研究結(jié)果如下

3、:
　　1.蔥蠅SNMP2基因克隆。分析蔥蠅轉(zhuǎn)錄組獲得4個來自SNMP2基因的序列片段。根據(jù)這些序列設(shè)計引物擴增得到了一段約1000bp序列。測序結(jié)果表明，該片段長度為1192 bp，包含蔥蠅SNMP2開放閱讀框的5'端序列，但缺失3'端。為獲得完整的蔥蠅SNMP2開放閱讀框，我們通過RACE方法擴增蔥蠅SNMP2基因的3'端序列，獲得一個775 bp的片段。將兩個片段進行拼接，最終獲得蔥蠅SNMP2（DantSNMP2）基因的完

4、整開放閱讀框。DantSNMP2開放閱讀框由1551個堿基組成，翻譯成的蛋白包括516個氨基酸殘基，分子量為58.22kD，理論等電點為8.51。
　　2.DantSNMP2序列分析。通過軟件分析DantSNMP2親水性，結(jié)果表明DantSNMP2包含兩個疏水性區(qū)域和一個親水性環(huán)狀結(jié)構(gòu)，證實DantSNMP2為雙跨膜蛋白。選取橘小實蠅（Bactrocera dorsalis）的SNMP1和SNMP2、致乏庫蚊（Culexquinq

5、uefasciatus）的SNMP1和SNMP2與DantSNMP2進行多重序列比對，結(jié)果表明，來自3個不同種昆蟲的5個SNMPs均包含6個保守的半胱氨酸殘基。推測這些半胱氨酸殘基參與3個二硫鍵形成，能夠穩(wěn)定DantSNMP2的空間結(jié)構(gòu)。將DantSNMP2與36條其他昆蟲SNMPs構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明昆蟲SNMPs分為SNMP1和SNMP2兩個家族，DantSNMP2與其他雙翅目昆蟲的SNMP2聚為一支，與鱗翅目昆蟲SNMP2親緣