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文檔簡介
1、目的:呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺組織內(nèi)NGF等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)水平顯著增高,抗NGF可減輕RSV感染致氣道神經(jīng)源性炎癥,提示NGF等神經(jīng)營養(yǎng)因子可能是RSV感染后神經(jīng)源性炎癥的主要因子,本課題研究神經(jīng)生長因子(NGF)誘導(dǎo)后的感覺神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及P物質(zhì)(SP)的表達(dá)及干擾素調(diào)節(jié)因子-1(IRF-1)的調(diào)控作用,以期進(jìn)一步闡明呼吸道合胞病毒感染后氣道神經(jīng)源性炎癥的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。
方法:
2、在培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元細(xì)胞(DRGn)、PC12細(xì)胞的基礎(chǔ)上,將兩種細(xì)胞各分為5個組,即①空白對照組;②NGF(100ng/mL)組;③陽性對照組:NGF(100ng/mL)+IFN-γ(100u/mL)組;④陰性干擾組:陰性對照vshRNA干擾+NGF(100ng/mL)組(NC-GFP-LV+NGF組);⑤干擾組:IRF-1-vshRNA干擾+NGF(100ng/mL)組(IRF-1-RNAi-LV+NGF組)。其中PC12細(xì)胞
3、預(yù)先用NGF50ng/mL處理,第④及第⑤組采用慢病毒IRF-1 siRNA預(yù)處理。然后各組暴露于NGF(100ng/mL)下16小時,最后采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測經(jīng)不同處理后各組細(xì)胞內(nèi)SPmRNA和iNOSmRNA表達(dá)的水平;Western blot方法檢測iNOS蛋白在不同處理組細(xì)胞中的表達(dá)情況。
結(jié)果:⑴NGF組,NGF+IFN-γ組及陰性對照vshRNA干擾+NGF組較正常空白對照組而言,各組細(xì)胞內(nèi)SPmRNA
4、及iNOSmRNA,蛋白表達(dá)水平均明顯升高(p<0.05);⑵與單純NGF組相比,NGF+IFN-γ組細(xì)胞內(nèi)SPmRNA表達(dá)水平無明顯變化(p>0.05),而iNOSmRNA表達(dá)水平明顯升高(p<0.05);⑶經(jīng)慢病毒IRF-1 shRNA阻斷IRF-1表達(dá)后,細(xì)胞內(nèi)SPmRNA及iNOSmRNA,iNOS蛋白表達(dá)水平,較單純NGF刺激組而言明顯降低(p<0.05)。
結(jié)論:NGF通過IRF-1調(diào)控感覺神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)SP及i
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