三氧化二砷誘導(dǎo)肝癌細胞株BEL-7402凋亡及抑制VEGF表達的研究.pdf

1、目的：本實驗研究As2O3誘導(dǎo)肝癌細胞株BEL-7402凋亡及對凋亡蛋白bcl-2/bax的影響；探討As2O3對肝癌細胞株BEL-7402血管內(nèi)皮生長因子表達的影響。　　方法：以MTT法觀察As2O3對肝癌細胞株BEL-7402生長的抑制；倒置顯微鏡下觀察肝癌細胞生長情況；姬姆薩染色、吖啶橙染色觀察不同濃度和作用時間下As2O3誘導(dǎo)肝癌細胞株BEL-7402凋亡的形態(tài)變化；流式細胞儀檢測細胞周期變化；間標法流式細胞技術(shù)測定As2O3

2、作用后肝癌細胞Bcl-2/bax的表達；免疫組化SABC染色法檢測As2O3作用后肝癌細胞VEGF的表達。　　結(jié)果：各濃度組As2O3(1-8μmol/L)均可抑制肝癌細胞增殖，且抑制率具有濃度和時間依賴性，同作用時間呈直線相關(guān)；倒置顯微鏡下每日觀察對照組和各實驗組細胞形態(tài)的變化，發(fā)現(xiàn)隨著濃度增高，肝癌細胞貼壁能力明顯下降，細胞脫落呈漂浮生長狀態(tài)，隨作用時間延長，脫落細胞逐漸增多，至72h時有70％-80％的細胞呈懸浮生長。低濃度的A

3、s2O3(1～2μmol/L)即對肝癌細胞株Bel-7402有明顯的抑制作用，且可使肝癌細胞發(fā)生凋亡；在姬姆薩染色、吖啶橙染色觀察凋亡細胞形態(tài)變化時，均可見到典型的凋亡細胞，晚期可見凋亡小體。流式細胞術(shù)細胞周期分析中，As2O3能將肝癌細胞阻滯于G2/M期，在G1峰前出現(xiàn)明顯的凋亡峰；流式細胞術(shù)對bcl-2、bax兩種基因編碼蛋白的表達進行檢測，經(jīng)As2O3作用的人肝癌細胞株Bel-7402bcl-2基因編碼蛋白表達減少,bax基因編碼

4、蛋白表達增加。用SABC免疫組織化學(xué)方法檢測肝癌細胞株BEL-7402VEGF的表達情況。結(jié)果顯示：癌細胞胞漿內(nèi)呈棕黃色，提示肝癌細胞中VEGF表達強陽性。經(jīng)DDP、As2O3分別處理后VEGF表達降至弱陽性(+-)，As2O3組較DDP組作用更明顯?！　〗Y(jié)論：1、As2O3能抑制肝癌細胞株BEL-7402生長并誘導(dǎo)其凋亡。2、As2O3能將肝癌細胞株BEL-7402阻滯于G2/M期。3、As2O3誘導(dǎo)凋亡與影響肝癌細胞株Bcl-2/