三氧化二砷誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡及抑制VEGF表達(dá)的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)研究As2O3誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡及對(duì)凋亡蛋白bcl-2/bax的影響；探討As2O3對(duì)肝癌細(xì)胞株BEL-7402血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響?！　》椒ǎ阂訫TT法觀察As2O3對(duì)肝癌細(xì)胞株BEL-7402生長(zhǎng)的抑制；倒置顯微鏡下觀察肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況；姬姆薩染色、吖啶橙染色觀察不同濃度和作用時(shí)間下As2O3誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株BEL-7402凋亡的形態(tài)變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化；間標(biāo)法流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定As2O3

2、作用后肝癌細(xì)胞Bcl-2/bax的表達(dá)；免疫組化SABC染色法檢測(cè)As2O3作用后肝癌細(xì)胞VEGF的表達(dá)。　　結(jié)果：各濃度組As2O3(1-8μmol/L)均可抑制肝癌細(xì)胞增殖，且抑制率具有濃度和時(shí)間依賴性，同作用時(shí)間呈直線相關(guān)；倒置顯微鏡下每日觀察對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)的變化，發(fā)現(xiàn)隨著濃度增高，肝癌細(xì)胞貼壁能力明顯下降，細(xì)胞脫落呈漂浮生長(zhǎng)狀態(tài)，隨作用時(shí)間延長(zhǎng)，脫落細(xì)胞逐漸增多，至72h時(shí)有70％-80％的細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng)。低濃度的A

3、s2O3(1～2μmol/L)即對(duì)肝癌細(xì)胞株Bel-7402有明顯的抑制作用，且可使肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡；在姬姆薩染色、吖啶橙染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)變化時(shí)，均可見到典型的凋亡細(xì)胞，晚期可見凋亡小體。流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期分析中，As2O3能將肝癌細(xì)胞阻滯于G2/M期，在G1峰前出現(xiàn)明顯的凋亡峰；流式細(xì)胞術(shù)對(duì)bcl-2、bax兩種基因編碼蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)As2O3作用的人肝癌細(xì)胞株Bel-7402bcl-2基因編碼蛋白表達(dá)減少,bax基因編碼

4、蛋白表達(dá)增加。用SABC免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞株BEL-7402VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：癌細(xì)胞胞漿內(nèi)呈棕黃色，提示肝癌細(xì)胞中VEGF表達(dá)強(qiáng)陽性。經(jīng)DDP、As2O3分別處理后VEGF表達(dá)降至弱陽性(+-)，As2O3組較DDP組作用更明顯?！　〗Y(jié)論：1、As2O3能抑制肝癌細(xì)胞株BEL-7402生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡。2、As2O3能將肝癌細(xì)胞株BEL-7402阻滯于G2/M期。3、As2O3誘導(dǎo)凋亡與影響肝癌細(xì)胞株Bcl-2/