晶狀體上皮細(xì)胞端粒酶活性及衰老、凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：(1) 明確晶狀體上皮細(xì)胞是否存在端粒酶活性表達(dá)。(2) 研究體外培養(yǎng)過程中晶狀體上皮細(xì)胞端粒酶活性的變化及細(xì)胞衰老、凋亡的情況。(3) 探討健康與衰老晶狀體上皮細(xì)胞對凋亡誘導(dǎo)因素敏感性的差異。
　　方法：(1) 采用端粒重復(fù)擴(kuò)增—酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)對羊、兔、健康及白內(nèi)障人類晶狀體上皮細(xì)胞的端粒酶活性進(jìn)行研究。(2) 體外培養(yǎng)兔晶狀體上皮細(xì)胞并傳代,檢測細(xì)胞端粒酶活性的變化,β-半乳糖苷酶組織化學(xué)染色檢測細(xì)胞衰老

2、,末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口末端標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡。(3) 10μmol/l喜樹堿誘導(dǎo)第1代、第4代與第7代細(xì)胞凋亡,比較細(xì)胞對凋亡誘導(dǎo)因素敏感性的差異。
　　結(jié)果：(1) 羊、兔及原代培養(yǎng)健康人類晶狀體上皮細(xì)胞存在端粒酶活性表達(dá),白內(nèi)障人類晶狀體上皮細(xì)胞不表達(dá)端粒酶活性。(2) 晶狀體上皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中端粒酶活性逐漸衰減,至第4代低于檢測水平,在體、原代至第3代晶狀體上皮細(xì)胞的酶活性分別為：0.459±0.046,

3、0.322±0.026,0.253±0.029,0.187±0.019,0.107±0.038；衰老細(xì)胞隨體外培養(yǎng)傳代增加。在體與原代培養(yǎng)的晶狀體上皮細(xì)胞無衰老現(xiàn)象,第1代至第9代的衰老細(xì)胞分別為：(0.984±0.39)%,(4.93±1.35)%,(11.08±1.69)%,(24.98±3.55)%,(33.89±3.74)%,(41.17±5.24)%,(51.75±8.32)%,(73.00±5.98)%,(77.00±14.

4、18)%；培養(yǎng)過程中未發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞。(3) 第1代、第4代與第7代晶狀體上皮細(xì)胞對凋亡的敏感性存在顯著性差異,喜樹堿誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為(23.86±3.45)%,(32.08±4.75)%和(38.294±4.01)%。
　　結(jié)論：(1) 健康晶狀體上皮細(xì)胞存在端粒酶活性表達(dá),白內(nèi)障人類晶狀體上皮細(xì)胞不表達(dá)端粒酶活性。(2) 體外培養(yǎng)過程中晶狀體上皮細(xì)胞的端粒酶活性逐漸衰減,衰老細(xì)胞增加,衰老的晶狀體上皮細(xì)胞不以凋亡