內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分氧化損傷的LEC中GRP78與Caspase-12表達(dá)及LEC凋亡的檢測(cè)與意義 目的：通過(guò)對(duì)氧化損傷的晶狀體上皮細(xì)胞（LEC）內(nèi)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）及半胱天冬氨酸酶-12（Caspase-12）的表達(dá)和LEC凋亡的檢測(cè)，探討其在晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷中的變化規(guī)律及與LEC凋亡的關(guān)系。 方法：體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04，將培養(yǎng)細(xì)胞分兩組，一組為對(duì)照組，另一組為氧化損傷組，氧化損傷組予以5

2、0ummol/l過(guò)氧化氫（H2O2）處理24小時(shí)。TUNEL檢測(cè)各組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率；RT-PCR半定量檢測(cè)各組中GRP78及Caspase-12的表達(dá)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.兩組晶體上皮細(xì)胞凋亡率：對(duì)照組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率為5.5％；氧化損傷組為49.3％，兩組比較差異有顯著性（P<0.05）。 2.GRP78mRNA的表達(dá)：對(duì)照組晶狀體上皮細(xì)胞GRP78mRNA表達(dá)的相對(duì)光密度值為1.164±

3、0.007；氧化損傷組為1.306±0.007，兩組比較差異有顯著性（P<0.05）。 3.Caspase-12mRNA的表達(dá)：對(duì)照組晶狀體上皮細(xì)胞Caspase-12mRNA表達(dá)的相對(duì)光密度值為0.201±0.021；氧化損傷組為1.273±0.039，兩組比較差異有顯著性（P<0.05）。 結(jié)論：LEC氧化損傷后其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)標(biāo)志物GRP78及Caspase-12表達(dá)和LEC凋亡率均明顯升高，由此可以推測(cè)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)

4、激反應(yīng)可能參與LEC氧化損傷后的凋亡過(guò)程。 第二部分2-DG預(yù)處理的LEC在氧化損傷時(shí)GRP78及Caspase-12表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究 目的：通過(guò)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后，氧化損傷的晶狀體上皮細(xì)胞中GRP78及Caspase-12表達(dá)及LEC凋亡的檢測(cè)，探討其在晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷中的作用。 方法：體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04，將培養(yǎng)細(xì)胞分為4組：正常組即A組；對(duì)照組（單純50ummol/L H2O2處

5、理）即B組；C組（4mmol/12-DG預(yù)處理組）；D組（8mmol/12-DG預(yù)處理組）。TUNEL檢測(cè)各組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率；RT-PCR半定量檢測(cè)各組中GRP78及Caspase-12的表達(dá)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.各組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率：A組晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率為5.5％；B組為49.3％；C組為24.6％；D組為18.75％，各組之間兩兩比較均有顯著性差異（P<0.05）。 2.GRP78m

6、RNA的表達(dá)：A組晶狀體上皮細(xì)胞GRP78mRNA表達(dá)的相對(duì)光密度值為1.164±0.007；B組為1.306±0.007；C組為1.515±0.004；D組為1.535±0.004，各組之間兩兩比較均有顯著性差異（P<0.05）。 3.Caspase-12mRNA的表達(dá)：A組晶狀體上皮細(xì)胞Caspase-12mRNA表達(dá)的相對(duì)光密度值為0.201±0.021；B組為1.273±0.039；C組為0.783±0.023；D組為0