B-LACTOGLOBULIN致敏性降低的免疫學(xué)機(jī)制.pdf

1、牛乳β-乳球蛋白（β-1g）是胎兒出生后遇到的第一個(gè)外來(lái)過(guò)敏原，并且它是導(dǎo)致牛乳蛋白過(guò)敏的主要過(guò)敏原。酶水解作用可以導(dǎo)致β-1g空間三維結(jié)構(gòu)的變化，但是該酶誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)變化對(duì)其致敏性的意義還不清楚。為了探明水解作用對(duì)β-1g致敏性或者抗原性的影響，本實(shí)驗(yàn)利用小鼠動(dòng)物模型研究了水解作用對(duì)β-1g致敏性的影響。
　　 本研究主要從以下幾個(gè)方面探討了水解降低β-1g致敏性的機(jī)制：脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)；EL，ISA方法檢測(cè)血清和小腸液中的Ig

2、E水平；利用試劑盒檢測(cè)血漿中組胺水平；還檢測(cè)了脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中各種細(xì)胞因子（IL-2，IL-4，IL-10，IFN-γ）水平，脾淋巴細(xì)胞表面抗原（CD4+，CD8+，CD3+，CD19+）。
　　 脾細(xì)胞是主要的淋巴細(xì)胞，本試驗(yàn)通過(guò)淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)來(lái)研究β-1g，和β-1g水解物在體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)作用，不加ConA組數(shù)據(jù)表明，和β-1g水解物以及OVA組相比，β-1g能夠顯著刺激脾淋巴細(xì)胞增殖（分別為p=0.01，p=0.001

3、），β-1g水解物和OVA相比，差異也是極顯著的。（10=0.002）。并且，加ConA的各組與不加ConA的實(shí)驗(yàn)組相比有相同的趨勢(shì)。例如β-1g組和酶β-1g水解物組以及OVA組相比，差異都顯著（分別為p=0.007，p=0.001）。除此之外，添加ConA和不添加ConA實(shí)驗(yàn)組相比，整體趨勢(shì)是不添加ConA組要比添加ConA組有較大的刺激性（p=0.508β-1gvsβ-1g+ConA）。
　　 使用ELISA方法檢測(cè)了小鼠

4、血清和小腸液IgE抗體水平，結(jié)果表明β-1g組小鼠血清IgE水平要高于β-1g水解物組小鼠，而小腸液中IgE水平和血清IgE水平變化趨勢(shì)一致，但是整體水平要高于血清。
　　 在本試驗(yàn)中，血漿組胺是通過(guò)ELISA試劑盒檢測(cè)的，結(jié)果表明，灌胃β-1g組小鼠血漿組胺水平顯著高于酶解β-1g組和OVA組（分別為p=0.002，p=0.000）。酶解β-1g組血漿組胺水平也顯著高于OVA組（p=0.007）。
　　 本實(shí)驗(yàn)還檢測(cè)了

5、脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th1型細(xì)胞因子（IL-2，IFN-γ）和Th2型細(xì)胞因子（IL-4，IL-10）。在脾細(xì)胞培養(yǎng)液中加入β-1g和β-1g水解物，和對(duì)照組細(xì)胞相比，對(duì)其細(xì)胞因子分泌水平影響不大，差異不顯著。但是，在有ConA存在時(shí)，β-1g顯著的刺激了IL-4，IL-10，IFN-γ的分泌。除此之外，由于β-1g的存在，抑制了ConA刺激的脾細(xì)胞中IL-2的表達(dá)，但是和空白組相比差異不顯著。另一方面，β-1g水解物增加了IFN-γ在

6、ConA刺激的脾細(xì)胞中的表達(dá)，但是對(duì)其他細(xì)胞因子的分泌沒(méi)有影響。這些結(jié)果說(shuō)明，β-1g水解物不但能夠抑制脾細(xì)胞增殖，還對(duì)細(xì)胞因子的分泌有調(diào)節(jié)作用。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)：
　　 對(duì)水解作用對(duì)β-1g致敏性的影響進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。利用β-1g作為致敏原，balb/c小鼠為動(dòng)物模型，研究血清IgE，血漿組胺水平，細(xì)胞因子水平，細(xì)胞表面抗原，解釋了水解作用降低β-1g致敏性的免疫學(xué)機(jī)制，為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、體液免疫等進(jìn)一步研究過(guò)敏降低機(jī)制提供