前列腺上皮細(xì)胞對(duì)間質(zhì)病理改變作用的研究.pdf

1、目的：“間質(zhì)-上皮相互作用”在前列腺的生理和病理過程中發(fā)揮著重要的作用。迄今為止，大部分關(guān)于“間質(zhì)一上皮相互作用”的研究主要集中在間質(zhì)細(xì)胞對(duì)上皮細(xì)胞的作用，主要是雄激素如何通過調(diào)節(jié)間質(zhì)細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子影響前列腺上皮細(xì)胞的增殖和分化。本文主要研究上皮細(xì)胞的旁分泌在前列腺間質(zhì)增生病理改變中的作用，包括雌激素如何通過調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子影響前列腺間質(zhì)細(xì)胞的增殖、分化和胞外基質(zhì)的蓄積。 在老年男性中，隨著年齡的增長(zhǎng)，血漿和前列腺組織

2、中雌/雄激素比例明顯增加。由于男性體內(nèi)的雌二醇主要來源于睪酮的芳香化，論文第一部分用不同類型前列腺上皮細(xì)胞系的條件培養(yǎng)液刺激前列腺間質(zhì)細(xì)胞，研究前列腺上皮細(xì)胞對(duì)間質(zhì)細(xì)胞中芳香化酶的調(diào)節(jié)機(jī)制；第二部分進(jìn)一步研究了雌二醇通過調(diào)節(jié)前列腺上皮細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子導(dǎo)致間質(zhì)細(xì)胞病理改變的分子機(jī)制。 方法：論文第一部分，添加1/3不同類型前列腺上皮細(xì)胞系BPH-1、LNCap、DU-145和PC3的條件培養(yǎng)液(CM)處理間質(zhì)細(xì)胞，用實(shí)時(shí)定量PT

3、-PCR和Western印記法檢測(cè)間質(zhì)細(xì)胞中芳香化酶mRNA和蛋白的表達(dá)水平；用煮沸使蛋白變性和氯仿萃取等方法初步分析前列腺上皮細(xì)胞系的條件培養(yǎng)液中對(duì)芳香化酶表達(dá)有促進(jìn)作用可能的活性因子。用添加環(huán)氧合酶2(COX-2)特異性抑制劑的培養(yǎng)液處理BPH-1，并收集CM，檢測(cè)其對(duì)間質(zhì)細(xì)胞芳香化酶表達(dá)的影響。 論文第二部分，用不同濃度雌二醇(E2)的處理BPH-1，收集CM培養(yǎng)人前列腺間質(zhì)細(xì)胞，研究其對(duì)間質(zhì)細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞外基質(zhì)蓄積

4、的影響。用MTT法檢測(cè)間質(zhì)細(xì)胞的增殖；用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中smoothelin、纖維粘連蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(COL Ⅳ)、TGFβ1及其受體TGFβⅠ型，Ⅱ型受體mRNA的表達(dá)；用Western blotting檢測(cè)間質(zhì)細(xì)胞平滑肌肌球蛋白重鏈(SM-MHC)的表達(dá)；用放射性免疫法和ELISA分別檢測(cè)COLⅣ、FN和TGFβ1的蛋白水平。用TGFβ1中和抗體預(yù)先中和BPH-1 CM，研究其對(duì)前列腺間質(zhì)細(xì)胞增殖、分化和胞外基

5、質(zhì)蓄積影響的分子機(jī)制。 結(jié)果：第一部分，良性前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1的條件培養(yǎng)液能促進(jìn)前列腺間質(zhì)細(xì)胞芳香化酶mRNA和蛋白的表達(dá)，但前列腺癌細(xì)胞系PC3、DU-145、22RV1對(duì)芳香化酶的表達(dá)沒有影響；經(jīng)過煮沸和氯仿萃取處理后的BPH-1條件培養(yǎng)液仍然對(duì)間質(zhì)細(xì)胞的芳香化酶有促表達(dá)作用。經(jīng)添加COX-2的特異性抑制劑尼美舒利和NS-398培養(yǎng)液處理的BPH-1細(xì)胞，其條件培養(yǎng)液失去了對(duì)芳香化酶的促表達(dá)作用；前列腺素E2可明

6、顯的誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞芳香化酶的表達(dá)。第二部分，用E2刺激的BPH-1 CM能促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的增殖；E2還可直接刺激平滑肌細(xì)胞富集的前列腺間質(zhì)細(xì)胞的增殖，而對(duì)于成纖維細(xì)胞富集的間質(zhì)細(xì)胞的增殖沒有明顯的刺激作用。 BPH-1 CM能明顯上調(diào)平滑肌細(xì)胞特異蛋白(smoothelin和SM-MHC)的表達(dá)，而經(jīng)E2刺激的BPH-1的CM可以使這種上調(diào)作用更加明顯。在體外培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞中，E2和睪酮(T)能明顯刺激TGFβ1基因和蛋白的表達(dá)水平

7、，雌激素受體抑制劑ICI 182.780和芳香化酶抑制劑可分別抑制E2和T對(duì)TGFβ1表達(dá)的促進(jìn)作用；DHT對(duì)TGFβ1基因的表達(dá)沒有影響。TGFβ1可明顯促進(jìn) smoothelin的表達(dá)；TGFβ1中和抗體能抑制雌二醇對(duì)smoothelin的促表達(dá)作用。 用有或無E2刺激的BPH-1的CM處理間質(zhì)細(xì)胞，COL ⅣmRNA和蛋白的表達(dá)明顯上升，培養(yǎng)液上清和細(xì)胞裂解液中COL Ⅳ蛋白的濃度分別上升了約4倍和1.5倍，而FN的表達(dá)沒

8、有明顯的變化；E2可直接劑量依賴的下調(diào)前列腺間質(zhì)細(xì)胞中MMP-2基因和蛋白水平的表達(dá)，而對(duì)TIMP-1，-2基因的表達(dá)沒有顯著性影響。 E2能夠上調(diào)BPH-1中TGF β1的表達(dá)和分泌，而且BPH-1 CM能促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞TGFβ1和TGFβⅠ型受體的表達(dá)；在BPH-1的CM中加入TGFβ1中和抗體，可以阻斷其對(duì)間質(zhì)細(xì)胞COL Ⅳ和SM-MHC表達(dá)的促進(jìn)作用。 結(jié)論：前列腺增生組織的上皮細(xì)胞通過分泌前列腺素E2促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞