明尼蘇達(dá)被毛孢（Hirsutella minnesotensis）相關(guān)種分類及其分子生態(tài)學(xué)研究.pdf

1、本研究對食線蟲被毛孢及其相關(guān)種進(jìn)行了分類研究；建立了明尼蘇達(dá)被毛孢實(shí)時熒光定量PCR檢測體系；將實(shí)時熒光定量PCR檢測方法應(yīng)用于田間土樣明尼蘇達(dá)被毛孢的檢測；實(shí)時熒光定量PCR結(jié)合寄生率測定方法，研究土壤因子對明尼蘇達(dá)被毛孢在土壤中的定殖和寄生活性。 線蟲內(nèi)寄生被毛孢及其相關(guān)種的分類。線蟲內(nèi)寄生被毛孢不同種及菌株間存在著形態(tài)、致病性和遺傳多樣性，明尼蘇達(dá)被毛孢與寄生螨類的湯普森被毛孢(H.thompsonii)在形態(tài)上極為相似，

2、針對這些問題進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和rDNAITS和MAPK基因分析研究，發(fā)現(xiàn)寄生腐生線蟲的被毛孢新種--線蟲被毛孢(Hirsutellavermicolasp.nov.)。該新種與洛斯里被毛孢的區(qū)別主要是產(chǎn)孢細(xì)胞頂部呈螺旋狀，對植物寄生線蟲不寄生或寄生性很弱。同時證明湯普森被毛孢的三個變種劃分不成立，修訂了湯普森被毛孢種的特征，進(jìn)一步證明明尼蘇達(dá)被毛孢與湯普森被毛孢是完全不同的種。 明尼蘇達(dá)被毛孢實(shí)時熒光定量PCR體系。明尼蘇達(dá)被毛孢是

3、我國大豆胞囊線蟲幼蟲最重要的寄生菌，可能是我國大豆胞囊線蟲自然衰退的主要生防因子，通過對明尼蘇達(dá)被毛孢rDNAITS區(qū)分析，設(shè)計(jì)出特異性的上游引物5’-GGGAGGCCCGGTGGA-3’和下游引物5’-TGATCCGAGGTCAACTTCTGAA-3’以及TaqMan探針5’-CGTCCGCCGTAAAACGCCCAAC-3’，通過PCR反應(yīng)體系優(yōu)化、?；院玩咦屿`敏度測定，建立了特異性的對土壤中明尼蘇達(dá)被毛孢定量測定的實(shí)時熒光定量P

4、CR體系，并且理論上能夠檢測到4個孢子/g土。 實(shí)時熒光定量PCR方法對田間土樣的檢測。利用建立的實(shí)時熒光定量PCR方法結(jié)合幼蟲寄生率分析，對采自黑龍江省大豆田的20份土樣進(jìn)行了研究，在9份土樣中分離到明尼蘇達(dá)被毛孢，3份土樣既沒有幼蟲寄生也沒有檢測到明尼蘇達(dá)被毛孢的DNA，在有真菌寄生的17份土樣中，6份土樣能夠檢測到明尼蘇達(dá)被毛孢，包括了所有幼蟲寄生率大于10％的5份土樣。這些結(jié)果證明實(shí)時熒光定量PCR能夠定量檢測自然土壤樣

5、品中的明尼蘇達(dá)被毛孢，與寄生率分析存在一定的相關(guān)性，但又有所不同，寄生率分析是檢測明尼蘇達(dá)被毛孢在土壤中的活性，而實(shí)時熒光定量PCR是檢測土壤中明尼蘇達(dá)被毛孢的生物量，兩種方法的結(jié)合能夠提供明尼蘇達(dá)被毛孢在土壤中更多的信息。 環(huán)境因子對明尼蘇達(dá)被毛孢在土壤中的定殖及寄生活性的影響。結(jié)合寄生率分析和實(shí)時熒光定量PCR方法在試管土中研究了土壤濕度、溫度和質(zhì)地對明尼蘇達(dá)被毛孢在土壤中的定殖和寄生活性的影響，證明在土壤溫度、濕度較低和粘