BEZ235體外抑制宮頸癌增殖與遷移作用研究及Skp2過表達的臨床意義.pdf

1、研究背景：宮頸癌作為女性第二大惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌。BEZ235是磷脂酰肌醇-3（PI3K）及其下游因子哺乳動物雷帕毒素蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的雙重靶向抑制劑，已表現(xiàn)出抑制多種腫瘤的作用，但在宮頸癌組織中的作用報道較少。S期激酶相關(guān)蛋白2（Skp2）是在調(diào)控細胞周期中發(fā)揮重要作用的蛋白，并參與細胞的增殖及凋亡。目前已發(fā)現(xiàn)Skp2蛋白在多種惡性腫瘤中呈過表達且導(dǎo)致腫瘤患者的不良

2、預(yù)后。文獻報道，Skp2對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響受PI3K信號通路的調(diào)控。在多種惡性腫瘤中，PI3K信號通路均可在轉(zhuǎn)錄和翻譯前、后水平上對Skp2蛋白進行調(diào)控。
　　研究目的：探討宮頸癌細胞中PI3K抑制劑BEZ235通過下調(diào)Skp2影響宮頸癌細胞的增殖及遷移能力；探討Skp2蛋白在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達的臨床病理學(xué)意義。
　　材料和方法：第一部分：宮頸癌Hela、C33A、SiHa細胞的傳代培養(yǎng)；噻唑藍（MTT）實驗檢測BE

3、Z235對細胞生長及增殖情況的影響，并繪制生長曲線，篩選藥物濃度；Hela和C33A細胞中加入0.1μM、0.4μM的BEZ235藥物，對照組加入等體積的DMSO，作用48h后，提取RNA及蛋白，通過RT-PCR法檢測宮頸癌細胞中Skp2 mRNA的變化，并用Western-blot法檢測宮頸癌細胞中Skp2、Ezrin、Six1蛋白的變化；劃痕實驗法檢測BEZ235對Hela細胞遷移能力的影響。第二部分：免疫組化方法檢測在25例正常宮

4、頸上皮組織、84例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）和163例宮頸鱗狀細胞癌（SCC）中Skp2蛋白的表達情況；RT-PCR法檢測人乳頭瘤病毒（HPV）在宮頸癌不同組織中的表達情況；結(jié)合宮頸癌HPV感染情況、臨床分期等生物學(xué)特點檢驗Skp2蛋白在宮頸癌組織表達的臨床病理學(xué)意義；統(tǒng)計學(xué)分析Skp2蛋白表達對患者生存時間的影響。
　　結(jié)果：第一部分：MTT實驗結(jié)果表明，用BEZ235阻斷PI3K信號通路可抑制宮頸癌細胞Hela、C33A和SiH

5、a的增殖；RT-PCR和Western blot結(jié)果表明，宮頸癌Hela和C33A細胞中Skp2 mRNA和Skp2、Ezrin、Six1蛋白的表達水平均隨BEZ235的濃度（0.1μM,0.4μM）增高而降低；劃痕試驗結(jié)果顯示，對宮頸癌Hela細胞進行BEZ235藥物處理24h、48h后，細胞移動距離較對照組明顯縮短。第二部分：RT-PCR檢測HPV mRNA在14例宮頸癌組織中有11例呈陽性表達；Skp2在CIN-1、CIN-2和C

6、IN-3中的陽性率依次增高，且均高于正常組織（P均＜0.01）；在宮頸鱗狀細胞癌中Skp2蛋白呈明顯的彌漫性強陽性染色，其陽性率顯著高于正常宮頸上皮組織（P<0.01）；Skp2蛋白表達與FIGO分期及高危型HPV感染關(guān)系密切（P<0.05）； Skp2蛋白陽性表達的宮頸鱗狀細胞癌患者無瘤生存率及總生存率明顯低于陰性表達的患者（P均<0.01）。
　　結(jié)論：1. PI3K抑制劑BEZ235通過下調(diào)Skp2蛋白抑制宮頸癌細胞增殖與遷