轉(zhuǎn)錄因子Ets1對胰島β細(xì)胞胰島素分泌和增殖的影響.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)錄因子Ets1對胰島β細(xì)胞胰島素分泌功能和增殖的影響及其相關(guān)機制。
　　方法:利用免疫熒光技術(shù)檢測Ets1在小鼠胰腺中的表達(dá)與定位，免疫組化技術(shù)檢測高脂喂養(yǎng)對Ets1磷酸化的影響。利用過表達(dá)Ets1的腺病毒感染分離的小鼠胰島，Elisa法檢測培養(yǎng)基中胰島素的濃度。基因芯片技術(shù)篩選出受轉(zhuǎn)錄因子Ets1調(diào)控并已證實與胰島素分泌相關(guān)的靶基因，利用腺病毒過表達(dá)或siRNA抑制Ets1表達(dá)后檢測其表達(dá)變化。用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)

2、和熒光素酶報告基因技術(shù)確定Ets1調(diào)控此靶基因的機制。用EdU和MTT方法檢測過表達(dá)及敲減Ets1后對Min6細(xì)胞株增殖的影響，并探討其機制。
　　結(jié)果:(1)轉(zhuǎn)錄因子Ets1主要在小鼠胰腺組織的β細(xì)胞中表達(dá);
　　(2)高脂喂養(yǎng)能夠誘導(dǎo)小鼠胰島中Ets1的磷酸化，在Min6細(xì)胞株中磷酸化Ets1的表達(dá)受葡萄糖濃度的調(diào)控;
　　(3)在離體小鼠胰島中過表達(dá)Ets1能夠抑制葡萄糖刺激的胰島素分泌;
　　(4)過表達(dá)

3、Ets1或抑制Ets1表達(dá)能夠分別促進(jìn)或抑制Txnip的表達(dá);
　　(5) Ets1能夠直接與Txnip基因的啟動子結(jié)合，并通過與p300協(xié)同作用共激活Txnip啟動子報告基因;
　　(6)過表達(dá)或抑制Ets1表達(dá)能夠分別抑制或促進(jìn)Min6細(xì)胞增殖，過表達(dá)Ets1能夠促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21表達(dá)。
　　結(jié)論:在胰島β細(xì)胞中，Ets1通過激活Txnip介導(dǎo)糖毒性誘導(dǎo)的葡萄糖刺激的胰島素分泌的損傷，并能夠促