胰島素對胰島β細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、近年來的研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)2型糖尿病患者在發(fā)病初期已出現(xiàn)胰島素的早期相分泌缺陷，反映其島β細(xì)胞功能已出現(xiàn)障礙，若及時(shí)治療則能夠部分或完全地恢復(fù)其胰島功能。另有研究者發(fā)現(xiàn)胰島素具有自分泌作用，且胰島β細(xì)胞本身也可發(fā)生胰島素抵抗，但具體機(jī)制尚不清楚。因此，本研究旨在觀察胰島素對胰島細(xì)胞的作用，結(jié)合基因和蛋白質(zhì)表達(dá)分析，討論其中可能的機(jī)制，并探索促進(jìn)胰島細(xì)胞生存和恢復(fù)正常功能的途徑。 本研究觀察了胰島素對大鼠原代胰島細(xì)胞(擁有完整的胰島結(jié)

2、構(gòu))和小鼠MIN6胰島β細(xì)胞株(單一的細(xì)胞類型)的作用，進(jìn)而在培養(yǎng)環(huán)境中添加胰島素抗體，以中和胰島素的效應(yīng)，并進(jìn)一步采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western蛋白印跡方法，從基因和蛋白表達(dá)層面分析了胰島素對胰島細(xì)胞的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，外源性胰島素(0.1nmol/L和100nmol/L)對大鼠原代胰島細(xì)胞和小鼠MIN6胰島β細(xì)胞株的葡萄糖刺激的胰島素分泌(GSIS)功能沒有明顯影響，與單純高濃度葡萄糖培養(yǎng)無差異(P＞0.05)；添加胰島素

3、抗體(0.125～2μg/ml)后，則表現(xiàn)胰島素分泌量降低(測定C肽，P＜0.05)，隨著培養(yǎng)和干預(yù)時(shí)間的延長，胰島素分泌量也隨之下降(P＜0.05)，呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)、時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，而加入相同濃度的無關(guān)抗體后，胰島素的分泌量與對照組沒有差異(P＞0.05)。形態(tài)學(xué)觀察也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)胰島素抗體干預(yù)的胰島細(xì)胞，較早出現(xiàn)胰島結(jié)構(gòu)的破壞和胰島細(xì)胞的死亡，因體外培養(yǎng)的環(huán)境中并不存在體液免疫和細(xì)胞免疫的完整體系，也排除了抗體免疫球蛋白的非特異作用，推

4、測其影響可能由胰島素抗體中和了環(huán)境中的胰島素所致。通過噻唑藍(lán)(MTT)的細(xì)胞活力分析也發(fā)現(xiàn)，小鼠MIN6胰島β細(xì)胞株在胰島素抗體干預(yù)后，活力較快下降。作為對照的相同濃度無關(guān)抗體對大鼠原代胰島或小鼠MIN6胰島β細(xì)胞株均無類似效應(yīng)?；蚝偷鞍踪|(zhì)表達(dá)研究顯示，胰島素或胰島素抗體對于胰島細(xì)胞的胰島素及其調(diào)控因子PDX-1的表達(dá)影響均不顯著，胰島素使Bcl-2的表達(dá)略有升高，而胰島素抗體則下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，并上調(diào)Bad和Bax的表達(dá)。提示胰