SOCCs對(duì)DO膀胱逼尿肌細(xì)胞興奮性和收縮性調(diào)控的初步研究.pdf

1、目的:
　　膀胱過(guò)度活動(dòng)癥(Overactive bladder,OAB)是一種常見(jiàn)的泌尿外科疾病,其定義為:OAB是一種以尿急癥狀為特征的癥候群,常常伴有尿頻和夜尿癥狀,可伴或不不伴有急迫性尿失禁,OAB可獨(dú)立發(fā)生,也可與其他泌尿系統(tǒng)疾病(如尿路感染、老年性排尿異常、神經(jīng)源性膀胱、下尿路梗阻、間質(zhì)性膀胱炎、下尿路腫瘤、泌尿系結(jié)石、不明原因的男女性尿頻)相伴發(fā)生。OAB病因不明,目前存在神經(jīng)源性和肌源性?xún)煞N學(xué)說(shuō),前者被廣泛接納但仍

2、有不能解釋的疑問(wèn),后者在近年來(lái)被廣泛關(guān)注。OAB的主要病理生理學(xué)改變是逼尿肌過(guò)度活動(dòng)(detrusor overactivity,DO)。
　　鈣離子(Ca2+)是細(xì)胞內(nèi)一種重要的無(wú)機(jī)陽(yáng)離子,Ca2+參與了細(xì)胞的許多生理活動(dòng)以及生理功能,在這其中,平滑肌的收縮性和興奮性的調(diào)節(jié)是一項(xiàng)重要作用。在鈣離子通道中,鈣庫(kù)調(diào)控的鈣離子通道(Store Operated Calcium Channels,SOCCs)參與了血管平滑肌、呼吸道平滑

3、肌的收縮和興奮的調(diào)控,進(jìn)過(guò)論證,我們推測(cè)SOCCs可能在膀胱逼尿肌細(xì)胞的興奮性和收縮性的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用,但是目前缺乏相關(guān)的證據(jù)。
　　因此,我們通過(guò)研究SOCCs在DO時(shí)的SD大鼠膀胱逼尿肌中的功能改變,探索SOCCs在OAB發(fā)生的機(jī)制和病理生理改變中的作用。
　　方法:
　　1.建立DO模型:取60只體質(zhì)量為180-200g的雌性SD大鼠,其中30只作為對(duì)照組,其余30只行下尿路部分梗阻(partial bla

4、dder outlet obstruction,PBOO)手術(shù),術(shù)后6周通過(guò)膀胱測(cè)壓法鑒定,選取其中出現(xiàn)不穩(wěn)定收縮的,即為DO模型,組成DO組;
　　2.膀胱逼尿肌離體肌條實(shí)驗(yàn):利用離體肌條牽拉實(shí)驗(yàn),采用SOCCs激動(dòng)劑CPA和抑制劑SKF-96365干預(yù),觀(guān)察SOCCs對(duì)膀胱逼尿肌離體肌條自發(fā)收縮情況(包括收縮頻率和收縮幅度)的影響,并對(duì)兩組的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較;
　　3.全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn):通過(guò)2步法急性酶分離法分離得到膀

5、胱逼尿肌細(xì)胞,分離得到的逼尿肌細(xì)胞采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀(guān)察其SOCCs電流,并用其激動(dòng)劑CPA和和抑制劑SKF-96365進(jìn)行干預(yù),觀(guān)察SOCCs電流的變化情況,并對(duì)兩組的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較;
　　4.鈣負(fù)載實(shí)驗(yàn):通過(guò)1步法急性酶分離法分離的膀胱逼尿肌細(xì)胞,培養(yǎng)24h后,用Fluo-4AM熒光染色,用激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察逼尿肌細(xì)胞內(nèi)的鈣離子熒光,用CPA和SKF-96365進(jìn)行干預(yù),觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光變化情況,并對(duì)兩組的結(jié)果進(jìn)

6、行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較;
　　結(jié)果:
　　1.DO模型建立成功,通過(guò)膀胱測(cè)壓,30只進(jìn)行PBOO手術(shù)的雌性SD大鼠有25只出現(xiàn)不穩(wěn)定收縮,成為DO模型大鼠;
　　2.膀胱逼尿肌離體肌條實(shí)驗(yàn)提示,采用CPA激活SOCCs后,離體逼尿肌肌條自發(fā)收縮頻率加快,幅度降低,采用SKF-96365抑制SOCCs后,離體逼尿肌肌條自發(fā)收縮頻率減慢,幅度回升,DO組與對(duì)照組相比,其自發(fā)收縮頻率的變化有顯著差異(P<0.05),而收縮幅度的變化差

7、異不顯著;
　　3.全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)提示,成功分離大鼠膀胱逼尿肌細(xì)胞,并記錄到CPA可激發(fā)SOCCs電流,SKF-96365可使SOCCs電流降低,兩組組相比,DO組在+20mv和-80mv的電流密度顯著高于對(duì)照組(P<0.05);
　　4.鈣負(fù)載實(shí)驗(yàn)提示:成功培養(yǎng)了原代膀胱逼尿肌細(xì)胞,利用激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察可知CPA可增加細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度[Ca2+]i,SKF-96365可降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度[Ca2+]i,兩組相比較