大麥HvRBR基因克隆與序列分析.pdf

1、植物RBR蛋白(retinoblastoma-related protein)是動(dòng)物pRB( retinoblastoma protein)的同源蛋白，廣泛表達(dá)于各種組織細(xì)胞中。RBR通過(guò)與其它蛋白質(zhì)間的互作，參與調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)，影響細(xì)胞增殖、分化及凋亡。鑒定RBR基因分子特征，明確其與同源基因間親緣關(guān)系和分類地位，對(duì)探索植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞增殖和分化相關(guān)調(diào)控途徑的研究具有重要意義。本研究試圖從栽培大麥（Hordeum v

2、ulgare）籽粒皺縮突變材料GSHO1854中分離并克隆RBR基因，并進(jìn)一步對(duì)所得核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行多序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析，獲得了以下主要結(jié)果：
　　 1.根據(jù)植物中已知RBR基因保守區(qū)域序列設(shè)計(jì)特異引物，采用同源克隆方法從大麥籽粒皺縮突變材料GSHO1854的DNA和苗期總cDNA中分別獲得1237bp、1810bp、895bp、1828bp、1214bp的gDNA片段以及683bp、929bp、679bp、121

3、3bp、573bp的cDNA片段。最終獲得全長(zhǎng)為5547bp的RBR基因DNA序列(GU121481)，及3179bp的cDNA序列(GU121480)。該序列包含2825bp的開放閱讀框，能編碼974個(gè)氨基酸殘基，預(yù)測(cè)其編碼蛋白質(zhì)的分子量約為107.9kDa，PI值為7.5。通過(guò)序列相似性分析，發(fā)現(xiàn)其與植物來(lái)源的RBR基因序列具有高度一致性，推測(cè)該基因即為大麥RBR基因(HvRBR)。
　　 2.序列分析表明，RBR基因可能包

4、含17個(gè)外顯子，口袋A區(qū)由第10個(gè)外顯子編碼，而口袋B區(qū)由第12-15個(gè)外顯子編碼。整個(gè)HvRBR氨基酸序列中包含15個(gè)CDK磷酸化位點(diǎn)，口袋B區(qū)也包含了19個(gè)帶正電荷的氨基酸殘基。HvRBR在A、B保守區(qū)之間有一個(gè)間隔區(qū)，雖然該間隔區(qū)同源性較低，但是Cys653卻很保守。說(shuō)明這個(gè)半胱氨酸殘基形成的分子內(nèi)或分子間二硫鍵可能對(duì)整個(gè)RBR蛋白的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要的影響。
　　 3.將本實(shí)驗(yàn)得到的HvRBR蛋白與已知RB/RBR蛋白氨