草莓pgip基因的克隆及其序列分析.pdf

1、多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibitingproteins，PGIPs)是內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶(endo-PG)的抑制劑，當(dāng)病原真菌侵染植物時(shí)，它能與病原真菌分泌的endo-PG專一性結(jié)合，一方面延緩病原真菌對植物細(xì)胞壁的降解，另一方面間接地影響病原真菌的生長繁殖速度，在抵御真菌病害方面發(fā)揮重要作用，同時(shí)引發(fā)植物的防衛(wèi)反應(yīng)。它還與大多數(shù)植物抗性基因一樣，屬于富亮氨酸重復(fù)(Leucine-richr

2、epeat，LRR)蛋白超家族。pgip基因在植物抗病育種中已成為一重要的候選基因，其分離鑒定是進(jìn)行轉(zhuǎn)pgip基因研究的基礎(chǔ)。 根據(jù)薔薇科植物pgip基因序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)兩對特異引物，以草莓(Fragaria×ananassaDuch)葉片制備的總DNA和總RNA為模板，采用PCR技術(shù)，克隆到了約1，300bp和1，000bp的DNA和cDNA片段。這兩條片段與pMD18-T載體連接后轉(zhuǎn)化E.coliJM109，對篩選到的陽性克

3、隆進(jìn)行序列測定與分析結(jié)果表明，獲得的DNA片段長1，389bp，含一個(gè)長度為168bp的內(nèi)含子，cDNA長1，053bp。BLAST比對結(jié)果表明，克隆到的片段是草莓的pgip基因，命名為Fapgip，GenBank登錄號(hào)為EU117215和EU117213。該片段含一個(gè)長度為999bp的完整開放閱讀框，編碼332個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，具有5個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，中心LRR結(jié)構(gòu)域由10個(gè)串聯(lián)的LRRs基序組成。預(yù)測該蛋白質(zhì)分子量為3

4、7.1kDa，等電點(diǎn)為7.67，N端24個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的疏水區(qū)域?yàn)樾盘?hào)肽。序列同源比對結(jié)果顯示，所克隆的Fapgip基因與薔薇科其它植物pgip基因核苷酸序列的同源性為75.2～86.5％，推導(dǎo)氨基酸序列的同源性為72.9～87.8％；同源樹表明其明顯區(qū)別于其它pgip基因；進(jìn)一步的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，所克隆的Fapgip(EU117213)除與樹莓的pgip(AJ620336)關(guān)系較近外，與壽星桃(AY903219)、美洲李(AY8