視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中BAG-1、BCL-2和P53表達(dá)的組織芯片檢測(cè).pdf

1、研究背景視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma，RB)是來(lái)源于視網(wǎng)膜細(xì)胞的惡性腫瘤，是嬰幼兒時(shí)期最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤。若RB治療不及時(shí)常會(huì)危及患者生命，眼球摘除還會(huì)給患者及家屬帶來(lái)痛苦，因而早期發(fā)現(xiàn)、早期治療對(duì)患者的預(yù)后至關(guān)重要。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制中得到最多公認(rèn)的是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因失活。而近年來(lái)對(duì)抗凋亡機(jī)制的研究較多，發(fā)現(xiàn)了一些抗凋亡因子在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中過(guò)表達(dá)，使人們認(rèn)識(shí)到抗凋亡因子參與了視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的發(fā)病，視網(wǎng)膜母細(xì)

2、胞瘤的發(fā)病是多因素的共同結(jié)果。Bag-1是目前研究最多的多功能抗凋亡基因，已證實(shí)它與bcl-2、p53等多種抗凋亡基因有密切聯(lián)系，廣泛存在于乳腺癌、胃癌、子宮頸癌等多種惡性腫瘤之中，但視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤之中是否存在bag-1，目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)BCL-2和P53在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中過(guò)表達(dá)，但尚無(wú)文獻(xiàn)對(duì)這三者之間的聯(lián)系作探討。 組織芯片是將大量的小組織片整齊地排列在載玻片上而成的微小組織切片，具有高效、快速、低消耗、

3、自身內(nèi)對(duì)照和可比性強(qiáng)的特點(diǎn)。組織芯片技術(shù)在多種研究領(lǐng)域已有較為廣泛的運(yùn)用，但目前尚未見有用于眼科領(lǐng)域的報(bào)道。 目的(1)制作和驗(yàn)證組織芯片用于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究。 (2)通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法觀察視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織芯片中BAG-1、BCL-2和P53的表達(dá)，并探討其與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的臨床關(guān)系，為視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制研究和診治提供新的思路。 方法(1)利用16例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織、5例正常視網(wǎng)膜組織和1例已知

4、上述三抗體陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌組織做成組織芯片，并與常規(guī)切片表達(dá)BAG-1情況進(jìn)行對(duì)比。 (2)采用免疫組織化學(xué)超敏S-P法、DAB染色檢測(cè)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和正常視網(wǎng)膜組織中BAG-1、BCL-2和P53的表達(dá)。分析其與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞類型和臨床預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果(1)22張標(biāo)本組織切片和組織芯片相對(duì)應(yīng)的22點(diǎn)染色結(jié)果為共同陽(yáng)性表達(dá)15例，共同陰性表達(dá)5例，不同表達(dá)者2例。其表達(dá)一致率達(dá)90.90％(20/22，K=0.77

5、1) (2)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織芯片中BAG-1、BCL-2和P53均有過(guò)表達(dá)。其中：①BAG-1經(jīng)染色后呈棕黃色顆粒狀，主要定位于胞漿，少數(shù)位于胞核中，腫瘤組陽(yáng)性率87.5％(14/16)，正常視網(wǎng)膜組陽(yáng)性率20％(1/5)，二者之間存在顯著差異(P=0.011，＜0.05)。②BCL-2經(jīng)染色后呈淡棕黃色顆粒狀，主要定位于胞漿，腫瘤組陽(yáng)性率93.75％(15/16)，正常視網(wǎng)膜組陽(yáng)性率40％(2/5)，二者之間存在顯著差異(P

6、=0.028，＜0.05)。③P53經(jīng)染色后呈棕黃色顆粒狀，主要定位于胞核，腫瘤組表達(dá)陽(yáng)性率為81.25％(13/16)，正常視網(wǎng)膜組無(wú)陽(yáng)性表達(dá)(0/5)，二者之間存在顯著差異(P=0.003，＜0.01)。④BAG-1的表達(dá)與P53高度一致性(K=0.765)，而BAG-1與BCL-2和P53與BCL-2的表達(dá)情況無(wú)一致性(K＜0)。 (3)BAG-1的表達(dá)強(qiáng)度與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分化程度無(wú)關(guān)(P=0.610，＞0.05)，

7、但其表達(dá)陽(yáng)性與腫瘤的預(yù)后負(fù)相關(guān)(P=0.025，＜0.05)。BCL-2的表達(dá)強(qiáng)度與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分化程度(P=0.625，＞0.05)和預(yù)后(P=0.813，＞0.05)無(wú)關(guān)。P53的表達(dá)強(qiáng)度與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的分化程度無(wú)關(guān)(P=0.304，＞0.05)，但與腫瘤的預(yù)后負(fù)相關(guān)(P=0.002，＜0.05)。 結(jié)論(1)組織芯片技術(shù)用于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白表達(dá)的研究是可靠的。 (2)BAG-1、BCL-2和P53在