蛋白磷酸酶抑制劑OA對心房顫動患者心房肌SK2通道功能的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：心房顫動(Atrial Fibrillation,AF)簡稱房顫,是臨床上最常見的心律失常,是心力衰竭(heart failure,HF)等心臟不良事件的重要危險(xiǎn)因素,在總體人群中房顫的發(fā)病率約為1％-2％。心房電重塑和胞內(nèi)鈣調(diào)控異常在房顫的發(fā)生和維持中起著重要作用。小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(SK)是新近發(fā)現(xiàn)的一類重要的鈣依賴性鉀離子通道,有資料表明在心房和心室肌細(xì)胞中SK2通道存在差異表達(dá),表明了針對SK2通道的特異配體在心房肌細(xì)胞起

2、作用,而不影響心室細(xì)胞功能,從另一角度看,心房功能的異常(如AF)可能也預(yù)示著SK2通道的改變。房顫時心肌細(xì)胞內(nèi)的激酶類和蛋白磷酸酶類會出現(xiàn)異常,由于2A型蛋白磷酸酶(protein phosphatase2A,PP2A)與SK2通道結(jié)構(gòu)性相連接,因此蛋白磷酸酶類異常很可能會對SK2通道功能產(chǎn)生影響。目前蛋白磷酸酶對SK2通道的影響以及SK2通道在房顫中的變化仍不清楚,本課題應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞電流記錄技術(shù),比較了SR組(sinus rhy

3、thm,SR)和AF組人心房肌細(xì)胞SK2通道的電流變化以及蛋白磷酸酶抑制劑okadaic acid(OA)對人心房肌細(xì)胞SK2通道電流的影響,旨在從細(xì)胞水平探討SK2電流在房顫中所起的作用以及弄清蛋白磷酸酶及其抑制劑對SK2電流的影響。方法:將34例接受體外循環(huán)手術(shù)的心臟病患者分為兩組: SR組23例,AF組11例,取其常規(guī)切除的右心耳組織,將心耳組織剪碎成1mm3的組織塊,放入酶液經(jīng)過兩步酶解后獲得心房肌細(xì)胞懸液,分離的細(xì)胞在24小時

4、內(nèi)使用。取急性酶分離的心房肌細(xì)胞懸液置于浴槽中央,加入全細(xì)胞浴液,選取貼壁良好,折光性強(qiáng)單個的心房肌細(xì)胞作為研究對象,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄全細(xì)胞電流,階躍方波脈沖方案:保持電位(holding potential,HP):-60 mV,從-130 mV以10 mV階躍除極至+60 mV,脈沖時程200 ms。所得電流通過膜片鉗放大器(MultiClamp700B)放大,濾波(1KHz)后輸入計(jì)算機(jī),用Clampex10.1軟件系統(tǒng)進(jìn)

5、行數(shù)據(jù)采集及分析。加入Apamin后再次記錄電流,計(jì)算SK2通道電流。加入蛋白磷酸酶抑制劑OA,觀察它對SK2通道電流的作用。結(jié)果:全細(xì)胞膜片記錄模式所記錄到的人心房肌細(xì)胞混合鉀電流,其I-V曲線表現(xiàn)出內(nèi)向整流特征,且AF組內(nèi)向整流混合電流密度大于SR組,在-130mV處電流密度分別為SR:-20.61±2.51pA/pF(n=23);AF:-41.51±5.37pA/pF(n=11), P<0.01。加入SK2通道特異性阻斷劑Apam

6、in后可以明顯抑制內(nèi)向整流混合電流,加入Apamin前后的電流密度相減可得到SK2電流,SK2電流也有明顯的內(nèi)向整流性質(zhì)。AF組SK2通道電流密度大于SR組,其中-130mV處電流密度為SR:3.67±0.37 pA/pF(n=9)AF:9.81±2.54 pA/pF(n=9), P<0.01。本實(shí)驗(yàn)中加入Apamin后再加入蛋白磷酸酶抑制劑OA,在-130mV處,加入Apamin后的電流密度為-14.80±4.03pA/pF,再加入O

7、A后,電流密度為-12.12±4.18pA/pF(n=6),P=0.20,說明OA主要對SK2通道起作用,對其他電流影響較小。OA對AF組內(nèi)向整流混合電流抑制率大于SR組,對SR組抑制率為12.51％±4.02(n=6),對AF組的電流抑制率為32.88％±9.20(n=4,P<0.05)。結(jié)論:AF組SK2電流大于SR組;PP2A參與對SK2通道的調(diào)控,抑制PP2A可使SK2電流密度下降,并且對Apamin敏感性降低;AF時,SK2通