沙利度胺聯(lián)合共刺激分子阻斷劑延長皮膚預(yù)致敏小鼠心臟移植物生存期的研究.pdf

1、目的:體內(nèi)預(yù)存的各種記憶細胞是器官移植中的重要障礙。記憶細胞對侵入的病原體產(chǎn)生強烈的免疫反應(yīng)，但同時會導致移植物發(fā)生排斥。研究發(fā)現(xiàn)，沙利度胺在初次器官移植中具有抑制免疫排斥反應(yīng)的作用，但其作用機制仍不明確。沙利度胺在器官移植中的潛在作用，很有可能使其成為作用于新靶點、高效低毒的免疫抑制劑。這里，我們擬研究沙利度胺聯(lián)合共刺激分子阻斷劑對皮膚預(yù)致敏小鼠心臟移植物生存期的作用，并探討其在免疫記憶中的作用機制。
　　方法:首先通過同種異體

2、皮膚移植得到預(yù)致敏小鼠，然后隨機將皮膚預(yù)致敏小鼠分成4組，每組6只。對照組（control組，Ctrl）給予同型抗體，共刺激分子阻斷劑組（Ab組）在心臟移植第0、2、4、6天腹腔注射0.25mg anti-CD154mAb+0.1 mg anti-LFA-1 mAb(ip.)，沙利度胺組（Thalidomide，TD組）從心臟移植第0天至第10天經(jīng)食管灌胃沙利度胺（100mg/kg/d）(ig.)，聯(lián)合用藥組（TD+Ab組）聯(lián)合沙利度胺

3、組和共刺激分子阻斷劑組方案。移植術(shù)后第4天，采集心臟移植物、受體脾臟及血清，通過記錄生存期、受體鼠體重、組織學分析、qRT-PCR、ELISA、細胞學研究方法和血清同種異型抗體水平的檢測分析，來全面評價此實驗中TD的協(xié)同作用。
　　結(jié)果:我們觀察到與對照組相比，同種異體心臟移植物在單獨給藥Ab組和TD組的生存期延長，（6±0.9;6±1.1 VS3.5±0.5天），而聯(lián)合給藥組心臟移植物生存期的顯著延長，（13.5±4.9 VS3

4、.5±0.5天;P＜0.01），各給藥方案對皮膚預(yù)致敏小鼠均無明顯毒副作用。分析結(jié)果，與對照組相比，給藥組的結(jié)果顯示:
　　(Ⅰ)不同程度的抑制心臟移植物的排斥反應(yīng);
　　(Ⅱ)移植物內(nèi)TNF-α、IFN-γ和IL-4表達減少，IL-2、IL-10和Foxp3的表達增加;移植物內(nèi)細胞毒性T淋巴細胞的細胞因子:FasL、顆粒酶B、穿孔素顯著降低，與此同時，血清中IFN-γ表達降低;
　　(Ⅲ)在受體鼠的脾臟中，顯著降低C

5、D8+記憶T細胞的比例，而提高了調(diào)節(jié)T細胞（Treg細胞）的表達;
　　(Ⅳ)在混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)中受體脾臟T細胞的增殖均被顯著抑制;
　　(Ⅴ)血清同種異型抗體的表達水平也顯著降低。
　　這些變化中，聯(lián)合給藥組顯示出的變化最顯著，證明在皮膚預(yù)致敏模型中，沙利度胺與共刺激分子阻斷劑聯(lián)合施用時，具有潛在協(xié)同作用。
　　結(jié)論:沙利度胺與共刺激分子阻斷劑聯(lián)用可顯著延長皮膚預(yù)致敏小鼠心臟移植物的生存期，在移植物中

6、，減輕炎性細胞浸潤，明顯降低炎性細胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4及細胞毒性細胞因子FasL、穿孔素和顆粒酶B的水平，同時上調(diào)IL-10和Foxp3;顯著降低外周血清中IFN-γ的水平;明顯降低脾臟CD8+記憶T細胞的比例、提高Treg細胞的表達并降低脾T細胞的同種異體反應(yīng)強度;顯著降低血清中同種異型抗體表達水平。通過該實驗我們推測，沙利度胺的作用機制可能是抑制了Th1和Th2型細胞及T細胞的活性，同時提高了調(diào)節(jié)性T細胞的活性，從