嬰幼兒配方奶粉中牛乳鐵蛋白含量免疫檢測方法的初步建立.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)是一種重要的鐵離子結(jié)合蛋白，屬于糖蛋白家族成員，具有抗菌和殺菌、抗病毒以及調(diào)節(jié)機體免疫等多種功能，因此近年來乳鐵蛋白被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和食品領(lǐng)域，尤其是在嬰幼兒配方奶粉中添加牛乳鐵蛋白（Bovine lactoferrin，BLF）是當(dāng)今研究的一個熱點問題。
　　目前乳鐵蛋白的檢測方法主要有高效液相色譜法、電泳法和酶聯(lián)免疫吸附法，因酶聯(lián)免疫吸附法具有快速方便，一次性可以同時檢測多個樣品的優(yōu)點，

2、因此在檢測方法中具有更大的優(yōu)勢。
　　本實驗利用常規(guī)的細胞融合技術(shù)制備出了6株抗牛乳鐵蛋白的單克隆抗體細胞株，分別為3H3、3A5、2B11、2B12、2E2和3D7，并將制備的腹水采用辛酸-硫酸銨法進行了純化。采用間接ELISA方法對抗體進行了效價測定和抗體交叉測定，實驗結(jié)果顯示5株單克隆抗體的效價均在1∶106以上;與牛乳中其它主要蛋白質(zhì)酪蛋白、乳白蛋白和β-乳球蛋白基本上無交叉反應(yīng);抗體親和力實驗結(jié)果顯示2B12抗體的親和常

3、數(shù)最高，因此實驗選擇2B12抗體用于雙抗體夾心實驗。實驗用牛乳鐵蛋白抗原免疫新西蘭大白兔獲得了55 mL的兔多抗血清，并對其進行了飽和硫酸銨純化，經(jīng)測定多克隆抗體效價可達到1∶107以上，與乳中主要蛋白質(zhì)酪蛋白、乳白蛋白和β-乳球蛋白交叉反應(yīng)微弱。實驗按照雙抗體夾心ELISA步驟進行測定，以純化的抗牛乳鐵蛋白多克隆抗體包被酶標(biāo)板，包被濃度為0.5μg/mL，以1％OVA37℃封閉1h，以0.01 MPBS作為標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，一抗稀釋濃度為