化學發(fā)光免疫分析技術(shù)

1、化學發(fā)光免疫分析技術(shù)化學發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassayCLIA)是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項最新免疫測定技術(shù)。目錄1簡介2原理3類型1.3.1化學發(fā)光標記免疫分析2.3.2化學發(fā)光酶免疫分析3.3.3HRP標記的C

2、LEIA4.3.4增強發(fā)光酶免疫分析5.3.5ALP標記的CLEIA4其他發(fā)光免疫分析技術(shù)1簡介簡介上世紀70年代中期Arakawe首先報道CLIA，發(fā)展至今已經(jīng)成為一種成熟的、先進的超微量活性物質(zhì)檢測技術(shù)，應用范圍廣泛，近10年發(fā)展迅猛，是目前發(fā)展和推廣應用最快的免疫分析方法，也是目前最先進的標記免疫測定技術(shù)，靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個數(shù)量級，可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯(lián)免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價

3、格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期（618個月）、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程CLEIA)應屬酶免疫分析只是酶反應的底物是發(fā)光劑操作步驟與酶免分析完全相同[5]:以酶標記生物活性物質(zhì)(如酶標記的抗原或抗體)進行免疫反應免疫反應復合物上的酶再作用于發(fā)光底物在信號試劑作用下發(fā)光用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)它們有各自的發(fā)光底物。HRPHRP標記的標記的CLEIACLEIA常

4、用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼luminol)或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼)是一類重要的發(fā)光試劑。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行在過氧化物酶及活性氧[過氧化陰離子(O2)單線態(tài)氧(1O2)羥自由基(OH)過氧化氫(H2O2)]存在下生成激發(fā)態(tài)中間體當其回到基態(tài)時發(fā)光其波長為425nm。早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體)但標記后發(fā)光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體進行免疫反應后利用魯米諾作為發(fā)

5、光底物在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑(NaOH2H2O2)作用下魯米諾發(fā)光發(fā)光強度依賴于酶免疫反應物中酶的濃度。KodakAmerliteTM半自動分析系統(tǒng)就是利用這一體系專門設計的。增強發(fā)光酶免疫分析增強發(fā)光酶免疫分析(enhanced(enhancedlumlumines2cenceines2cenceenzymenzymeimmimmunoassayunoassayELEIAELEIA)在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強發(fā)光劑如對2碘苯酚等以增強發(fā)

6、光信號并在較長時間內(nèi)保持穩(wěn)定便于重復測量從而提高分析靈敏度和準確性。在全自動分析儀上還可通過計算機嚴密控制進行自動操作如加試劑混合溫育洗滌加發(fā)光試劑發(fā)光計數(shù)數(shù)據(jù)處理繪制標準曲線直至完成病人血清樣品的分析并打印出結(jié)果。AmerliteTM發(fā)光增強酶免分析系統(tǒng)用熒光素、噻唑等增強劑其發(fā)光時間可持續(xù)長達20min試劑盒有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、游離甲狀腺素與性激素有關的有促黃體激素、促卵泡激素

7、、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。ALPALP標記的標記的CLEIACLEIA所用底物為環(huán)122二氧乙烷衍生物這是一類很有前途的發(fā)光底物用于化學發(fā)光酶免分析底物而設計的分子結(jié)構(gòu)中包含起穩(wěn)定作用的基團——金剛烷基其分子中發(fā)光基團為芳香基團和酶作用的基團在酶及起動發(fā)光試劑作用下引起化學發(fā)光。最常使用的底物是AMPPD[32(2’2spiroadaman2tane)42methoxy242